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近年来,乳品中检测出抗生素残留的事件频出,严重影响我国的出口贸易和消费者健康。随着各部门对食品中药物残留的监管力度不断加大,对相关的检测技术也提出了更高的要求,传统的仪器检测方法已难以满足市场的需求。建立高通量、快速、方便的检测方法对乳品中药物残留检测有重大意义。本研究以牛奶中残留的磺胺类（SAs）、四环素类（TCs）、磺胺增效剂和纳他霉素四类抗生素为研究对象,制备了相应的灵敏度高、广谱性或特异性的单克隆抗体,并在此基础上建立相应的免疫快速检测方法。（1）设计并合成了七种磺胺类药物的半抗原,获得了两种具有不同识别性的单克隆抗体2G3和3D1,其亚型分别是IgG1和IgG2b。其中抗体2G3对应的免疫原为半抗原S1的偶联物S1-BSA,包被原是同源的S1-OVA;抗体3D1对应的免疫原为半抗原S5的偶联物S5-BSA,包被原为异源的S3-OVA。抗体2G3的最佳包被浓度和抗体浓度分别为0.125μg/mL和0.25μg/mL,对磺胺甲噁唑（SMZ）的IC50为0.15μg/L,线性范围为0.03-0.63μg/L,相关系数为0.992,IC50在5μg/L以下的SAs药物有11种。抗体3D1的最佳包被浓度和抗体浓度分别为0.5μg/mL和0.25μg/m L,对磺胺二甲基嘧啶（SM2）的IC50为0.51μg/L,线性范围为0.11-2.33μg/L,相关系数为0.992,IC50在5μg/L以下的SAs药物有25种。牛奶中SMZ和SM2的回收率范围分别为:89.6%-119.0%和95.3%-118.0%。（2）建立了基于单克隆抗体3D1的可同时检测蜂蜜中二十七种SAs的胶体金试纸条方法。金纳米粒子和单抗偶联的最佳pH为1mL胶体金溶液中加入6μL 0.1 M K2CO3溶液,最佳抗体浓度为0.4 mg/mL。包被抗原的浓度为0.2 mg/mL。比色法检测蜂蜜的消线值在2.5-100μg/kg之间,检测限在1-25μg/kg之间,可以用于高通量的现场快速检测。（3）合成了三种TCs药物的完全抗原,筛选到了群选性的TCs的单克隆抗体5B11,其亚型为IgG2a,对应的免疫原为TC-BSA,包被原为同源的TC-OVA。利用抗体5B11建立了牛奶和蜂蜜中的间接竞争ELISA法（ic-ELSIA）。其最佳工作条件为:包被原浓度为0.25μg/mL,抗体5B11浓度为0.125μg/mL,在此条件下,抗体对TC的IC50为0.41μg/L,线性范围为0.18-3.09μg/L,抗体对土霉素（OTC）、金霉素（CTC）、强力霉素（DC）的交叉反应率分别为87.2%、22.5%、18.9%。牛奶中的TC、OTC、CTC、DC四种药物的回收率范围分别为:93.5%-101.2%、95.3%-105.1%、95.6%-101.5%、89.9%-92.3%。蜂蜜中的回收率范围为:95.6%-100.5%、89.5%-101.3%、91.8%-103.7%、89.7%-102.3%,说明此ELISA方法可以用于牛奶和蜂蜜样本的检测。（4）建立了基于单抗5B11的同时检测牛奶和蜂蜜中四种TCs的胶体金试纸条方法。金标抗体偶联的最佳条件为:1mL胶体金溶液中加入6μL 0.1 M K2CO3溶液,抗体的浓度为0.2 mg/mL,包被抗原的浓度为0.3 mg/mL。比色法对牛奶中TC、OTC、CTC、DC的消线值分别为:10μg/L、10μg/L、20μg/L、25μg/L;检测限分别为:0.5μg/L、0.5μg/L、1μg/L、5μg/L。对蜂蜜中四种药物的消线值分别为:20μg/kg、20μg/kg、40μg/kg、40μg/kg;检测限分别为:0.8μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、4μg/kg,可以满足TCs残留的检测要求。（5）分别合成了三甲氧苄啶（TMP）、二甲氧苄啶（DVD）、奥美普林（OMP）三种磺胺增效剂的完全抗原,制备出了针对三种药物的特异性单抗。对于TMP的单抗2A4,其亚型为IgG1,建立的ic-ELISA方法的最佳工作条件为:包被浓度为0.1μg/mL,抗体浓度为0.1μg/mL,标品稀释液（0.01 M PBS）的pH为7.2、NaCl浓度为0.8%、乙腈浓度为10%。在最佳工作条件下对TMP的IC50为4.14μg/L,线性范围为1.83-9.36μg/L,相关系数为0.995。阴性牛奶、蜂蜜、鱼肉样本中TMP的回收率范围分别为:103.5%-118.0%、100.3%-107.1%、91.5%-108.1%。对于DVD,筛选出单抗3E2,其抗体亚型为IgG2b,建立的相应的ic-ELISA的最佳工作条件为:包被原浓度为0.1μg/mL,抗体浓度为0.1μg/mL,标品稀释液（0.01 M PBS）的pH为7.2、NaCl浓度为0.8%。在最佳工作条件下对DVD的IC50为0.43μg/L,线性范围为0.13-1.38μg/L,相关系数为0.99。阴性牛奶和蜂蜜样本中的DVD回收率范围分别为:93.9%-113.8%和89.0%-109.8%。对于OMP的单抗1G10,其抗体亚型为IgG2a,建立的ic-ELISA的最佳工作条件为:包被原浓度0.3μg/mL,抗体浓度0.03μg/mL,标品稀释液（0.01 M PBS）的pH为7.2、NaCl浓度为1.6%。在此条件下对OMP的IC50为5.14μg/L,线性范围为1.44-20.47μg/L,相关系数为0.998。阴性牛奶和蜂蜜样本中OMP的回收率范围分别为:88.9%-107.6%和89.7%-113.9%。（6）分别建立了基于单抗2A4和3E2的胶体金免疫分析方法,适用于牛奶和蜂蜜样本中的TMP和DVD检测。对于TMP,金标抗体偶联的最佳条件为:1m L胶体金溶液中加入6μL 0.1 M K2CO3溶液,抗体浓度为0.4 mg/mL,包被抗原的浓度为0.3mg/mL。牛奶和蜂蜜中TMP的消线值分别为25μg/L和25μg/kg,检测限分别为2.5μg/L和2μg/kg。对于DVD,金标抗体偶联的最佳条件为:1mL胶体金溶液中加入4μL 0.1M K2CO3溶液,抗体浓度为0.2 mg/mL,包被抗原的浓度为0.2 mg/mL。牛奶和蜂蜜中DVD的消线值分别为5μg/L和10μg/kg,检测限分别为0.5μg/L和1μg/kg。（7）通过合成纳他霉素的完全抗原免疫小鼠,制备出一株高度特异性的单克隆抗体3E5,并建立了ic-ELISA和胶体金试纸条法。Ic-ELISA的最佳工作条件为:包被浓度0.1μg/mL,抗体浓度0.03μg/m L,标准品稀释液（0.01 M HEPES）的pH为7.2、甲醇含量为5%。该方法对Nata的IC50为1.69μg/L,线性范围为0.64-4.46μg/L,相关系数为0.997。在牛奶、果汁、酸奶、奶酪中的回收率范围为:102.5%-120.5%、102.6%-121.1%、83.9%-113.8%、88.7%-108.2%。胶体金试纸条的最佳条件为:1 mL胶体金溶液中加入4μL 0.1 M K2CO3,抗体浓度为0.4 mg/mL,包被原浓度为0.2 mg/mL。试纸条对牛奶和酸奶样本中Nata的消线值分别为20μg/L和125μg/kg,检测限分别为2μg/L和25μg/kg。