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背景:急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一种急性进行性呼吸衰竭,其临床特征表现为呼吸窘迫和顽固性低氧血症。ARDS在重症病房的发病率为10.4%,死亡率高达40%。多脏器衰竭是ARDS患者最主要死因,包括心、肝、肾、胃肠道等脏器功能衰竭,其中肾脏是最早发生衰竭的器官。据统计,ARDS患者发生急性肾脏衰竭(acute kidney injury,AKI)的比例约为44.3%。目前,机械通气是ARDS患者的主要治疗手段,有研究表明,ARDS机械通气患者发生AKI的几率是非机械通气患者的3倍。危重病患者发生AKI的危险因素研究发现,ARDS和机械通气分别是AKI的两个独立危险因素,但两者在AKI中的作用机制尚未完全明确。有研究认为机械通气的ARDS患者肺部会释放炎症因子及活性介质进入血流,经体循环到达肾脏诱发AKI。肾脏近端小管上皮细胞是AKI发生时各种应激源的重要靶点,在AKI动物模型中可见肾脏近端小管上皮细胞自噬水平升高。外泌体是粒径在30-200 nm之间的小囊泡,它由细胞主动分泌至胞外,广泛存在于体液中,它可将其内容物递送至靶细胞并影响细胞功能,被称为细胞间通讯的第三种机制。本研究旨在探究ARDS机械通气背景下的大鼠血浆外泌体对肾脏近端小管上皮细胞自噬水平的影响及机制。目的:1、建立盐酸诱导的ARDS大鼠通气模型,提取并鉴定血浆中外泌体;2、探究ARDS大鼠血浆来源外泌体对NRK-52E自噬的影响及机制。方法:1、通过气管灌注盐酸并对大鼠进行6小时损伤性机械通气,建立大鼠ARDS的双打击模型,并设置气管灌注盐水组作为对照。2、通过测定动脉氧合指数(P/F ratio)、肺组织病理HE染色及肺损伤评分,对肺组织损伤程度评估。3、采用共沉淀法(试剂盒)提取大鼠血浆外泌体,运用透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析仪器(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)及免疫印迹试验(Western Blot,WB)鉴定外泌体。4、体外试验:共聚焦显微镜检测NRK-52E对荧光染料标记外泌体的摄取;外泌体刺激NRK-52E细胞后,自噬染色试剂盒法及ELISA检测细胞内LC3 B蛋白法评估细胞自噬水平。5、大鼠血浆外泌体测序:illumina高通量测序技术平台,对外泌体mi RNA测序,分析不同组别外泌体mi RNA表达差异。结果:1、气管灌注盐酸后大鼠P/F ratio降低,组织学肺损伤评分增加。2、透射电子显微镜结果显示大鼠血浆外泌体呈双层圆囊泡状;NTA结果显示大鼠血浆外泌体粒径峰值为:137.5 nm;免疫印迹试验可检测出外泌体特异性标志蛋白CD81和TSG101;3、NRK-52E可摄取大鼠血浆外泌体进入细胞;4、自噬染色试剂盒法结果显示,与他莫西芬阳性对照组相比,外泌体刺激组不能引起NRK-52E细胞自噬增加;ELISA结果显示,外泌体刺激组自噬标志蛋白LC3B水平未显著升高。5、盐酸组与盐水组大鼠血浆外泌体相比,显著表达差异的mi RNA为246个;盐水通气组与盐水组大鼠血浆外泌体相比,显著表达差异的mi RNA为236个;盐酸通气组与盐酸组大鼠血浆外泌体相比,显著表达差异的mi RNA为202个;盐水通气组与盐水组大鼠血浆外泌体相比,显著表达差异的mi RNA为225个;盐水通气组与盐水组大鼠血浆外泌体相比,显著表达差异的mi RNA为105个。结论:证实ARDS大鼠血浆外泌体可被NRK-52E细胞摄取,但不能引起NRK-52E细胞自噬水平的增加,ARDS大鼠血浆外泌体mi RNA表达相比其他组别有显著差异。