论文部分内容阅读
目的:肺癌是发病率和死亡率增长最快,对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。肺癌己成为全球恶性肿瘤死因的首位。大量研究明确提出:吸烟、职业暴露、环境污染等被认为是肺癌的危险因素。尽管绝大多数肺癌的发生与这些因素相关,但是仅有15%的吸烟者最终发生肺癌,有不足10%的肺癌患者则从不吸烟。近来,随着分子生物学研究水平的不断进展,肺癌遗传易感性的影响逐渐被重视。血管增生是肿瘤的发生和发展的重要一步,可以有效促进肿瘤的生长、侵袭和转移。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是已知作用最强的促血管生成因子之一,近来报道提示:在一些肿瘤性疾病如:乳腺癌,胃癌、肺癌、前列腺癌和食管癌等可以检测到患者血、尿或肿瘤组织内VEGF表达量增加。VEGF基因具有高度多态性,目前至少发现了30个单核苷酸多态性(SNP)位点。本研究旨在探讨VEGF基因启动子区-2578C/A和+405G/C单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与中国北方汉族人群肺癌(lung cancer)发病风险的关系。方法:采用基于医院的病例-对照研究方法,采集172例肺癌患者(其中鳞状细胞癌62例、腺癌41例、腺棘细胞癌17例、小细胞肺癌26例、其他病理类型包括大细胞癌、印戒细胞癌、透明细胞癌、肉瘤样癌、细支气管肺泡癌等26例)和184例健康对照个体的静脉抗凝血5ml,同时记录其病史和个人相关资料。采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法于外周血采集一周内提取其白细胞DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP )分析方法和引物介导的限制性聚合酶链反应(primer-introduced restriction analysis PCR, PIRA-PCR)方法检测VEGF-2578C/A和+405G/C SNPs的基因型频率分布。数据统计分析采用SPSS11.5版软件包(SPSS Company,Chicago,Illinois,USA)进行分析,P<0.05认为有统计学意义。比较各位点基因型频率的观察值与预期值进行卡方检验,并行Hardy-Weinberg平衡分析。病例组与对照组的年龄差异行t检验。病例组与对照组的基因型、等位基因型分布比较采用行×列表卡方检验。采用EH软件分析VEGF-2578C/A和+405G/C基因单体型频率,2LD软件(1.2 version,Rockefeller University,New York)分析连锁不平衡状态。以非条件Logistic回归法计算经性别、年龄和吸烟状况校正的相对风险度的比值比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)。结果: 1肺癌组的吸烟者比例(58.1%)明显高于健康对照组的(42.4%)存在显著性差异(χ2=8.200, P =0.004)。吸烟可显著增加肺癌发病风险,经性别和年龄校正后的OR=2.448, 95%CI =1.382~4.337。2健康对照组中的VEGF -2578C/A多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。肺癌患者组VEGF -2578C/A SNP C和A等位基因频率分别为70.9%、29.1%;健康对照组中等位基因频率分别为78.5%、21.5%;肺癌组中A等位基因频率明显高于对照组,两组比较有统计学意义(χ2=5.064,P=0.020)。三种基因型(C/C、C/A、A/A)分布频率:健康对照组分别为60.9%、35.3%、3.8%;肺癌组的基因型频率分别为49.4%、43.0%、7.6%。由于A/A基因型频率较低,遂将C/A与A/A基因型合并。合并后肺癌患者组的C/C、C/A+A/A基因型频率分别为49.4%、50.6%;健康对照组基因型频率分别为60.9%、39.1%。两组间基因型分布有统计学意义(χ2=4.265,P=0.033)。与C/C基因型相比,携带A等位基因(C/A+A/A)的基因型可显著增加肺癌的发病风险。经性别、年龄和吸烟情况校正后OR=2.019,95%CI=1.290-3.158。根据个体吸烟状况进行分层分析发现,与C/C基因型相比,携带A等位基因(C/A+A/A)的基因型可显著增加吸烟人群的发病风险。经性别和年龄校正后的OR=2.043,95%CI=1.090-3.827。根据肺癌病理类型进行分层分析发现,与C/C基因型相比,携带A等位基因的基因型(C/A+A/A)明显增加肺鳞状细胞癌发病风险,经性别、年龄和吸烟状况校正后的OR值是2.073;95%CI是1.025-4.191。3健康对照组中的VEGF +405G/C多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。VEGF +405 G/C基因型和等位基因频率分布在肺癌组与健康对照组之间均无统计学意义(P>0.05)。根据个体吸烟状况分层分析发现,与G/G基因型相比,携带C等位基因的基因型(G/C+C/C),可增加吸烟个体肺癌的发病风险,经性别和年龄校正后的OR=2.402,95%CI=1.177-4.904。根据肺癌病理类型进行分层分析发现,与G/G基因型相比,携带C等位基因的基因型(G/C+C/C),明显增加肺鳞状细胞癌发病风险,经性别、年龄和吸烟状况校正后的OR值是2.210;95%CI是1.081-4.517。4应用2LD软件对VEGF -2578 C/A与VEGF +405 G/C多态性位点进行联合分析显示,两多态性位点间不存在连锁不平衡(D’=0.27149)。结论:1吸烟可以明显增加肺癌的发病风险。2 VEGF -2578C/A单核苷酸多态性与肺癌发病风险相关,与C/C基因型相比,携带A等位基因的基因型(C/A+A/A)可显著增加肺癌的发病风险。根据个体吸烟状况分层分析发现,其主要与吸烟个体肺癌的发病风险相关,与C/C基因型相比,携带A等位基因的基因型(C/A+A/A),明显增加吸烟个体肺癌的发病风险。根据病理类型进行分层分析发现,携带A等位基因的基因型(C/A+A/A),增加肺鳞状细胞癌发病风险。3 VEGF +405G/C单核苷酸多态性与吸烟个体肺癌的发病风险相关,携带C等位基因的基因型(G/C+C/C),可增加吸烟个体肺癌的发病风险。根据病理类型分成分析发现,携带C等位基因的基因型(G/C+C/C),增加肺鳞状细胞癌发病风险。