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目的通过研究系统阐述高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞体外增殖、凋亡及自噬水平的调控。方法1类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞分离培养及鉴定。1.1非选择性选取类风湿性关节炎患者10例,消化酶培养法及组织块培养法培养所取滑膜组织。1.2光学显微镜观察及波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色鉴定所培养样本,观察其是否为类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞并探讨其培养方式。2高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响。2.1 PI染色后经流式细胞仪分析各组细胞S/G2变化,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物作用下细胞分裂相的改变。2.2 CCK-8法检测各组细胞增殖情况,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物影响下细胞增殖改变。3高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。3.1 Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物作用下细胞早期凋亡率与总凋亡率变化。3.2 Western blot检测Bax、Bcl-2的灰度比值的变化,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物影响下细胞凋亡相关蛋白表达改变。4高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞自噬的影响。4.1 Western blot检测LC3II的表达差异,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物复合物对自噬蛋白表达的作用。4.2免疫荧光染色,荧光显微镜观察自噬相关蛋白LC3II的表达情况,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对自噬蛋白表达的影响。结果1采用消化酶法以及组织块培养法培养所取材原代细胞,两种方法无明显差异,光学显微镜观察并Vimentin免疫组织化学鉴定所取材及培养的细胞为实验所需的类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞。2高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物干预类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞48h后,PI染色实验与CCK-8实验结果显示高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物组类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖明显,处于S/G2期细胞明显增多,差异有统计学意义。3 Annexin V-FITC/PI染色实验结果以及Western blot中Bax以及bcl-2的表达结果显示高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物干预48h后类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡无显著变化,差异无统计学意义。4 Western blot与免疫荧光LC3Ⅱ的表达结果显示高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物干预48h后类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞自噬无显著变化,差异无统计学意义。结论本研究实验条件下,高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、但对其凋亡以及自噬无明显调控作用。高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物可导致类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞病理性改变,在RA病程中发挥重要作用。