新型NO荧光探针的机理和应用研究

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NO是体内普遍存在的信号分子,参与了众多复杂的生理过程,在神经传导,能量代谢,免疫应答,炎症反应和肿瘤的发生发展中扮演了重要角色,因此,发展NO检测技术具有很重要的研究意义。目前检测NO的技术包括Griess分析,电化学感应器法,电子自旋共振,氧化血红蛋白法,化学发光法,荧光检测法等,他们都有各自的优缺点。Lippard等人报道了新型的荧光素铜(Ⅱ)配合物探针可以用于NO的实时检测,具有很高的灵敏度和选择性,但是因为体内稳定性不够而不适合用于体内检测。本实验就新型的苯并咪唑和萘并咪唑衍生物荧光探针进行了NO检测的机理和应用研究。   新型的苯并咪唑和萘并咪唑衍生物荧光探针HPBI和HPNI化合物具有较大的Stokes位移,较高的量子产率,荧光稳定,不易淬灭等特点。我们通过荧光光谱,紫外-可见光谱,MALDI-TOF-MS质谱,红外光谱,电子顺磁共振等试验测定,证明了HPBI和HPNI可以和铜(Ⅱ)离子快速配合形成不具有荧光效应的配合物,而后可以和NO在没有氧气的条件下发生快速反应,生成HPBI和HPNI的亚硝酰化产物,同时荧光被恢复。该反应具有很高的灵敏度和选择性,提示HPBI和HPNI的铜(Ⅱ)配合物可以用来进行NO的直接快速检测。   在细胞实验中,HPBI和HPNI-铜(Ⅱ)配合物展现了低毒性,荧光稳定性好,高分辨率,快速而直接成像的特点。进而我们研究了HPBI和HPNI-铜(Ⅱ)配合物在急性重症肝炎小鼠模型中的NO成像特性。该探针表现出了很好的稳定性,可用于炎症中NO检测,其荧光成像结果具有很好的分辨率和专一性。这些结果表明该配合物可以作为新型NO荧光探针用于相关研究。
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