常规细胞遗传学和荧光原位杂交技术在肺癌遗传学研究中的应用

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目的:应用常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)方法,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术和光谱核型分析(Spectral karyotyping,SKY)技术对新鲜的肺癌标本进行检测,探索肺癌细胞的染色体异常,以揭示肺癌发生、发展的内在本质,并为肺癌临床诊断、预后判断和早期治疗提供可靠依据。 方法:实验分为三个部分,第一部分取24例手术切除的新鲜肺癌组织迅速制作成单细胞悬液,行改良过夜培养法(overnight culture,OC)制备染色体并通过R显带进行核型分析,即通过CC法初步了解肺癌染色体异常情况。第二部分采用FISH技术检测肺癌间期细胞,用8、11、12、17、X、Y染色体的着丝粒探针观察染色体数目的异常。第三部分应用SKY技术对二例具有复杂染色体异常的标本进行检测,以查明染色体畸变的性质。 结果:在24例肺癌中,采用改良的过夜培养法获得中期分裂相的病例占41.67%(10/24)。通过CC发现9例异常核型,染色体结构和数目都发生了比较复杂的改变。染色体众数以亚二倍体和亚三倍体较常见。染色体的数目增加依次为8、12、17、X、7和11号;而染色体的丢失依次为3、Y、13、5和9号等;另外还有不明来源的标记染色体。结构改变涉及1、2、3、4、9、11、15和17号染色体,包括部分扩增、缺失、易位及衍生染色体等畸变。间期FISH证实了肺癌染色体异常中有X、8、11、12、17号染色体数目增加和Y染色体的丢失,而且发现了CC法未发现的染色体的增加和丢失异常。此外,应用SKY技术检测二例核型分析均显示相当复杂的染色体数目和结构异常的肺癌标本。结果发现,染色体结构改变主要累及常规细胞遗传学和荧光原位杂交技术在肺癌遗传学研究中的应用中文摘要1、2、3、4、6、8、l、13、15和17号等。特别是二例均有3号与17号染色体的易位,以及涉及13号染色体的易位(l号与13号或12号与13号易位),这些易位是CC未曾发现的。 结论:常规细胞遗传学是研究肺癌染色体异常的常用方法,但成功率不高。原因是肺癌细胞的有丝分裂活性低下、分裂相质量甚差且核型极为复杂。间期核FISH发现染色体超二体改变是恶性肿瘤的重要特征,它具有省时、准确、简便等优点,能够验证常规核型分析,并进行有力的补充。SKY能够揭示常规核型分析法难以识别的染色体易位、重排的来源和一些marker的来源。分子细胞遗传学方法与常规细胞遗传学技术互为补充,二者联合使用,能深入了解肺癌的生物学特征,为今后肺癌的早期诊断、治疗和预后的判断提供新的科学依据。
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