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研究背景与目的：肺癌仍是最普遍和最致命的的癌症,其发病率与病死率在过去的几十年内迅速增长,迄今为止,病死率已居恶性肿瘤之首。目前对于肺癌的治疗手段主要有：手术治疗、化疗、放疗、靶向治疗等，已经形成了多学科综合治疗方案。但是肺癌患者的5年生存率仍然较低。因此研究者们在积极的探索肺癌新的治疗方法。端粒酶是由RNA组分和蛋白组分组成的核蛋白体。其中人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）是端粒酶的催化亚基是端粒酶活性的必需和限速成分,其水平决定细胞端粒酶的活性。端粒酶活性被认为在细胞永生化和癌变中起关键作用，与肺癌的发生，发展，转移有密切关系，因此hTERT有望成为肺癌治疗的新靶点。hTERT主要功能是维持端粒的长度，而近年来hTERT许多非依赖端粒的作用被发现，包括：基因的表达调控，对细胞生长和繁殖的调控，在线粒体中保护线粒体的功能等。同时有学者研究发现了hTERT在亚细胞结构的分布情况：约60%在细胞核、20%在线粒体、20%在细胞质。然而这个比例并不是一成不变的，在高氧化应激条件下，核内的hTERT于24小时内向核外转移50%-60%。因此，hTERT在细胞内处于动态的平衡，在线粒体hTERT保护线粒体DNA(mtDNA)降低线粒体活性氧（reactive oxygen species，ROS）进而维持细胞的活性是细胞受到刺激后自我修复的重要机制之一。核转录因子kappaB（Nuclear factor kappa B NF-κB）是一种重要的转录激活因子。其主要参与机体防御反应，应激，细胞分化和凋亡等过程的信息传递。研究表明：NF-κB信号通路与hTERT的表达密切相关。NF-κB信号通路激活可以通过核转位结合hTERT启动子调节转录水平hTERT含量。在我们课题组前期的实验中表明NF-κB抑制后可有效减少hTERT在肺癌中的表达，并对肺癌细胞的生长产生影响。那么NF-κB信号通路是否对细胞高ROS下hTERT线粒体转位有影响呢？这成为我们研究的重点。本课题中用抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（Ammoniumpyrrolidinedithiocarbamate PDTC）来抑制NF-κB信号通路。研究NF-κB信号通路对肺癌细胞株H1299高氧化应激条件下hTERT线粒体转位中的作用。完善hTERT核-线粒体转位并保护线粒体功能完整的机制。研究内容和方法：1．Real Time RT-PCR、Western Blot技术检测NF-κB信号通路活性抑制时高氧化应激状态下对细胞hTERTmRNA和蛋白的表达情况2．免疫荧光、Western Blot技术检测NF-κB信号通路活性抑制时高氧化应激状态下对细胞hTERT核-线粒体转位的影响3．Real Time RT-PCR、Western Blot技术检测NF-κB信号通路主要蛋白P65与hTERT转位之间的关系结果：1. Real Time RT-PCR、Western Blot技术检测结果表明：在高氧化应激状态下hTERTmRNA和蛋白的表达量明显增加，而抑制NF-κ B信号通路活性后hTERTmRNA和蛋白的表达量没有明显增加；2.线粒体蛋白Western Blot结果提示：在高氧化应激状态下hTERT向线粒体转位，抑制NF-κB信号通路活性后高氧化应激状态下hTERT线粒体转位减少；3.免疫荧光结果提示：在高氧化应激状态下hTERT向线粒体转位，抑制NF-κB信号通路活性后hTERT线粒体转位减少；4．Real Time RT-PCR、Western Blot技术检测结果提示：在高氧化应激条件下hTERT向线粒体转位NF-κB P65mRNA、蛋白表达增加。结论：1. NF-κB信号通路活性的抑制能够下调高氧化应激引起的hTERT高表达；2. NF-κB信号通路活性的抑制可以减少hTERT的线粒体转位；3. NF-κB信号通路主要蛋白P65与hTERT线粒体转位密切相关。