【摘 要】
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目的:一位诊断为髓系/淋系肿瘤伴嗜酸性粒细胞增多症的年轻女性患者骨髓标本中存在13号染色体内易位,RNA-seq检测发现患者骨髓标本存在罕见融合基因ZMYM2-FLT3,由于融合基因在血液疾病的诊断、治疗及预后中有重要作用,因此对该罕见融合基因进行鉴定并探索其发病及治疗机制就具有重要意义。方法:RNA-seq检测该患者存在融合基因ZMYM2-FLT3;针对该融合基因设计两对特异性引物并应用PCR方
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目的:一位诊断为髓系/淋系肿瘤伴嗜酸性粒细胞增多症的年轻女性患者骨髓标本中存在13号染色体内易位,RNA-seq检测发现患者骨髓标本存在罕见融合基因ZMYM2-FLT3,由于融合基因在血液疾病的诊断、治疗及预后中有重要作用,因此对该罕见融合基因进行鉴定并探索其发病及治疗机制就具有重要意义。方法:RNA-seq检测该患者存在融合基因ZMYM2-FLT3;针对该融合基因设计两对特异性引物并应用PCR方法在该患者骨髓样本中进行验证;构建该融合基因及阴性对照慢病毒,转染Ba/F3细胞系构建稳转细胞株;CCK8实验检测该融合基因可促进Ba/F3细胞系的增殖;选择三种常用酪氨酸激酶抑制剂索拉菲尼、舒尼替尼和米哚托林,应用CCK8实验检测三种抑制剂对表达该融合基因细胞系增殖的作用,应用流式细胞术检测三种抑制剂对表达该融合基因的细胞系凋亡的作用;应用Western blotting验证下游底物磷酸化表达情况。结果:1、应用RNA-seq测序发现该患者位于染色体13q12位置的FLT3基因与同一位置的ZMYM2基因发生融合,并用PCR及Sanger测序验证了该融合基因的存在;2、融合基因ZMYM2-FLT3可使Ba/F3细胞的生长不依赖于IL-3,促进细胞的增殖（P＜0.05）;3、三种酪氨酸激酶抑制剂均可抑制表达该融合基因细胞的增殖（P＜0.05）;4、三种抑制剂均可促进表达该融合基因细胞的凋亡（P＜0.05）;5、该融合基因可使STAT3和ERK1/2发生磷酸化,三种抑制剂可减少磷酸化的发生。结论:我们的研究在一例患者中发现并鉴定出罕见融合基因ZMYM2-FLT3,在小鼠原B淋巴细胞Ba/F3中证明该融合基因具有激酶活性,促进细胞的增殖,发现ZMYM2-FLT3可使STAT3、ERK1/2发生磷酸化,并证明三种酪氨酸激酶抑制剂可以抑制该细胞的增殖、促进该细胞的凋亡,还可减少细胞内磷酸化STAT3和ERK1/2的表达水平。
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