凡纳滨对虾Toll6基因克隆及功能研究

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对虾传染性疾病的爆发导致高死亡率,给水产养殖业带来巨大的损失。由于免疫系统在疾病预防中有重要作用,人们对虾类免疫的研究兴趣日益增加。从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) cDNA中克隆到一个新的Toll基因(简称1Toll6),该基因可翻译出1227个氨基酸,蛋白中包含了Toll样受体(TLR)基因家族中独特的功能结构域,细胞外结构域含有23个富含亮氨酸重复(LRRs),细胞质一侧是一个Toll/interleukin-1 receptor(TIR)结构域。1Toll6全长序列与疟蚊(Anopheles gambiae)、果蝇(Drosophila melanogaster)及意大利蜜蜂(Apis mellifera)的Toll6最为相近。TIR结构域与疟蚊Trex及果蝇Toll8有较高同源性,分别为51.4%及49.3%。 RT—PCR结果显示1Toll6在肝胰腺、胃、后盲囊中表达量较其他组织高,在神经、脑、眼柄、心脏、肠、肌肉、表皮、鳃、血中表达量差异不大。Western Blot检测显示1Toll6蛋白在心脏、后盲囊、肌肉中有表达。Realtime PCR结果显示血细胞中1Toll6在真菌刺激以后表达量显著上升,革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、WSSV及生理盐水刺激后表达量变化不大。而在肝胰腺中,1Toll6在革兰氏阳性菌、真菌及WSSV刺激下表达均有大幅提高,革兰氏阴性菌刺激后表达变化不大。Toll基因的克隆是研究虾类Toll途径天然免疫的基础。
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