两栖动物通过抗菌肽组来防御环境中病原微生物的侵袭，抗菌肽种类和结构都有很高的多样性，大多数进化受正选择驱动。但是，我们前期研究发现，黑斑侧褶蛙（Pelophylax nigromaculata）的Temporin抗菌肽有多个基因座位，受到强烈负选择作用，在不同地理种群中十分保守，可能是抗菌肽免疫系统中基本的、支柱性的成员。但该基因内含子的进化方式还尚未清楚。本研究以中国大陆28个地区的黑斑侧褶蛙为对象，以线粒体D-loop区序列分析的种群遗传多样性水平和地理格局作为参照，分析Temporin基因内含子的进化模式。结果显示，黑斑侧褶蛙大陆种群分为A、B两大支系。28个地区得到的Temporin基因只编码一种成熟肽，显示出高度保守性，而内含子2880bp左右的片段内发现了112个突变位点，核苷酸多样性（π）为0.00659，远低于D-loop区（π=0.03233），整体上接近于中性进化状态，且未表现出显著的地理种群分化。进一步分析发现，该内含子具有31个与表达调控相关的作用元件，但除极少数突变之外，几乎所有的突变均发生在作用元件的间隔序列上，选择压力检测显示，作用元件区受到较强的负选择压力，而间隔区处于中性进化状态。该内含子较低的遗传多样性主要源自于这些位点的负选择压力。上述结果进一步支持了Temporin基因在抗菌肽免疫系统中起到基础性、支柱性作用。　　实验中发现Temporin基因内含子因一个6bp的同向重复序列（5-AGACCT-3）的存在，在体外和体内扩增时均可引发滑动，导致扩增产物出现一个564bp的缺失，本研究也讨论了引发这一滑动的机制。