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急性肺损伤(ALI)是由多种肺外致病危险因子导致的以血管通透性增加为主要临床表现的肺的炎症综合症，其发病机理非常复杂，病死率高达50-70％，迄今为止尚无特效的治疗措施。核因子-кB(NF-кB)是一种基因转录调节蛋白，内毒素、休克等细胞外刺激通过信号转导通路，引起NF-кB核易位，启动和调节多种炎症介质(TNF-α等)的基因转录，其活化与ALI的发病密切相关。目前认为，NF-кB激活通路在机体炎症、免疫反应中发挥重要作用，IкB激酶β亚型(IKK-β)在NF-кB活化过程中起着关键作用。多粘菌素B(PMB)是一种具有显著抗内毒素作用，同时抑制IKK-β激活的抗生素。近年来，关于PMB拮抗内毒素活性、致热性以及急性期反应等方面的研究取得了很大进步，但关于它是否可以影响NF-кB的激活通道而发挥进一步的抗炎作用文献检索未见报道。本实验通过体外内毒素(LPS)刺激大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)在细胞水平模拟急性肺损伤，观察PMB对LPS刺激大鼠PAM中NF-кB活化的影响，探讨 第四军医大学硕土学位论文PMB对NF－h激活通路的影响及其在ALI中可能的抗炎作用机制。 实验方法：用支气管肺泡灌洗①AL）收集、分离并培养大鼠PAM。实验分为正常对照组o生理盐水厂 LPS刺激组o LPS10mg／L）及PMB＋LPS干预组（ X 10’UI PMB作用 0．sh再加 LPS10mg／L）。各组PAM在刺激后0、1八、112、l、二和4h分别固定，提取P规核蛋白并收集细胞培养上清，采用原位杂交（ISH）技术、凝胶电泳迁移率改变aMSA）及ELISA法，观察PAM中IKK－p mRNA表达、Ith一口水平、核蛋白提取物中NF－h的活性和细胞培养上清中TNF Q的含量。 实验结果：LPS刺激组IKK－p mRNA的水平，在刺激后l／4h出现升高，l／Zh达到高峰；Ith一口的水平的变化趋势与IKK－p rnRNA刚好相反。＊Lh活性的峰值相对于刺激前和正常对照组有显著升高（均购．01），峰值出现在刺激后IAlh。培养上清中TNF一口的含量亦显著高于刺激前和正常对照组（均功．of卜PMB干预组NF－h的活性与TNF山的含量虽较刺激前和正常对照组升高，但均显著低于＊＊S刺激组护均＜0刀1卜IthJ水平的最低值显著高于LPS刺激组什动刀1）；而IKK小 QRNA的峰值则显著低于uS刺激组o功＊＞ 结论：PAM在遭受LPS刺激后，导致IKK－p激活、lth一日发生降解及NF－h的活化，并引起TNF一口的释放。其中NF－h的迅速活化可能是PAM大量释放TNF Q等前炎细胞团于引发ALI的关键环节；它们之间存在着一条 IKK－p－Ith－a NF－Id3－TNF一口信号传导的依次通路，这条通路在ALI发病中起着重要的作用。PMB则能抑制LPS的上述作用，在ALI细胞模型中发挥抗炎作用，其抗炎作用机理可能是其除作为抗生素外，还具有直接站抗LPS的作用，同时可能作为IKK－p抑制剂影响IKK－P激活，从而在基因转录水平上抑制NF－h的活化，阻断其介导的细胞因子及炎症介质（TNF a等）的失控性释放有关。