牛乳中硝基苯检测方法及代谢物动力学研究

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硝基苯是一种无色或微黄色具苦杏仁味的油状液体,是一种有毒有害物质,损害神经系统,并能引起高铁血症甚至发生溶血,能够导致肝脏等器官的实质病变,而它的代谢产物毒性更强。2005年11月13日,中石油吉化双苯厂爆炸导致硝基苯泄漏,对松花江沿岸环境造成严重污染。目前牛乳中硝基苯的检测方法国内外还未见报道,本研究以气相色谱(GC)法作为硝基苯的定量手段,对松花江沿岸黑龙江省段主要奶牛场的鲜牛奶中是否存在硝基苯的残留进行了检测。结果表明:松花江沿岸从肇源县到佳木斯桦川县6个市县共8个牛场随机抽取的1000个奶样,均未检出硝基苯。本研究建立的气相色谱法能够迅速准确检测乳中硝基苯,为乳业的安全生产提供了保障。本研究以高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)作为硝基苯代谢产物氨基酚、硝基苯胺和硝基酚的定量手段,采用MCPKP自动化药动学分析程序分析其浓度-时间数据,以不同剂量硝基苯一次和多次连续给奶牛经口染毒,分别研究了硝基苯的三种主要代谢产物氨基酚、硝基苯胺和硝基酚在奶牛乳中的动态变化规律和残留消除规律。结果表明:一次染毒硝基苯后乳中三种代谢产物浓度随时间而变化的规律符合一级吸收一室模型,其中,剂量为5mg/kg·b·w时,氨基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.1866μg·mL-1,T1/2Ka=0.7689h,T1/2K=21.1291h,AUC=6.4492mg·L-1·h-1,Tp=3.8153h,Tcp=93.0460h;硝基苯胺的主要动力学参数为:Cmax=1.2112μg·mL-1,T1/2Ka=1.5375h,T1/2K=9.0995h,AUC=22.8300mg·L-1·h-1,Tp=4.7469h,Tcp=67.7320h;硝基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.6741μg·mL-1,T1/2Ka=0.7351h,T1/2K=9.7586h,AUC=11.8560mg·L-1·h-1,Tp=3.6196h,Tcp=62.4250h;剂量为10mg/kg·b·w时,氨基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.2174μg·mL-1,T1/2Ka=0.6919h,T1/2K=20.4116h,AUC=7.2112mg·L-1·h-1,Tp=3.4974h,Tcp=94.1930h;硝基苯胺的主要动力学参数为:Cmax=1.3398μg·mL-1,T1/2Ka=1.1862h,T1/2K=9.1791h,AUC=24.0660mg·L-1·h-1,Tp=4.2309h,Tcp=68.9070h;硝基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.9518μg·mL-1,T1/2Ka=1.2016h,T1/2K=8.6544h AUC=16.4010mg·L-1·h-1,Tp=4.3929h,Tcp=60.9140h。以不同剂量连续染毒硝基苯,停止染毒后乳中三种代谢产物从乳中的消除服从一级动力学过程,其中,剂量为25mg/L时,氨基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.4486μg·mL-1,T1/2=1.7752d,AUC=1.1492mg·L-1·d-1,Tcp=9.7435d;硝基苯胺的主要动力学参数为:Cmax=5.353μg·mL-1,T1/2=0.9824d,AUC=7.5888mg·L-1·d-1,Tcp=8.9069d;硝基酚的主要动力学参数为Cmax=2.4467μg·mL-1,T1/2=1.0671d,AUC=3.7676mg·L-1·d-1,Tcp=8.4690d;剂量为50mg/L时,氨基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.5726μg·mL-1,T1/2=1.7049d,AUC=1.4086mg·L-1·d-1,Tcp=9.9571d;硝基苯胺的主要动力学参数为:Cmax=5.4383μg·mL-1,T1/2=0.9888d,AUC=7.7596mg·L-1·d-1,Tcp=8.9872d;硝基酚的主要动力学参数为:Cmax=2.7421μg·mL-1,T1/2=1.0639d,AUC=4.2098mg·L-1·d-1,Tcp=8.6185d;剂量为100mg/L时,氨基酚的主要动力学参数为:Cmax=0.6363μg·mL-1,T1/2=1.6634d,AUC=1.5274mg·L-1·d-1,Tcp=9.9688d;硝基苯胺的主要动力学参数为:Cmax=6.0906μg·mL-1,T1/2=0.9724d,AUC=8.5462mg·L-1·d-1,Tcp=8.9971d;硝基酚的主要动力学参数为:Cmax=2.9304μg·mL-1,T1/2=1.0611d,AUC=4.4867mg·L-1·d-1,Tcp=8.6976d。药动学研究结果表明:乳牛在染毒硝基苯以后,不论是一次染毒还是连续染毒,乳中三种代谢产物的消除服从一级动力学过程,但三者乳中浓度和消除速率不同,氨基酚的浓度最低,消除速率也最慢,三种代谢物的消除速率与染毒剂量相关性较小。本试验探讨了乳中硝基苯的气相色谱检测方法,评价了该方法的快速准确性,并且探讨了高效液相色谱法同时检测硝基苯在动物体内的三种主要代谢产物氨基酚、硝基苯胺和硝基酚的色谱条件,克服了以往对每种物质单独检测费时费力的缺点,不但为以后的科研工作提供了科学依据,并且对乳业的安全生产具有理论和现实的意义。本试验揭示了硝基苯三种主要代谢产物在牛乳中的代谢动力学规律,阐述了三种代谢产物的半衰期及在乳中代谢物存在的时间,通过药动学结果可以看出,奶牛如果误饮了被硝基苯污染的水后,在十天后牛奶可以安全饮用,这一结果对科研和生产实践具有重要意义。
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