实验目的:CO2点阵激光技术是一种应用于瘢痕的新型微创治疗手段,本课题通过雌性红色杜洛克猪(The Female Red Duroc Pig,FRDP)植皮后瘢痕模型研究临床常用的两种不同模式(低能量高密度,高能量低密度)的CO2点阵激光治疗模式的疗效差异,探究两种不同模式的CO2点阵激光治疗瘢痕和改善瘢痕外观的机制,以及评估联合使用两种模式是否能取得更好的治疗效果,为临床上面对不同种类的瘢痕选择合适的CO2点阵激光模式提供依据。实验内容:1,在FRDP身上建立植皮后瘢痕模型,观察FRDP植皮后瘢痕模型的外观特征,生物学特性以及组织学特点。2,使用两种CO2点阵激光模式(浅层次高密度,深层次低密度)分别治疗FRDP植皮后瘢痕,分析两次激光治疗后两种模式所产生的疗效差异。评价指标包括:主观评估,厚度,面积,弹性,平整度,颜色以及组织学检测。3,使用两种CO2点阵激光模式(浅层次高密度,深层次低密度)叠加治疗FRDP植皮后瘢痕,分析联合模式是否能达到更佳的疗效。评价指标包括:主观评估,厚度,面积,弹性,平整度,颜色以及组织学检测。实验设计:一.模型构建与实验分组3月龄FRDP,以脊柱分为左右两侧,每侧做3cmX 3cm全层机械创伤8处,共两只,32个创面。切除全层真皮及皮下组织后原皮片回植,建立FRDP植皮后瘢痕模型,筛选建模成功皮片(皮片成活面积>80%记为建模成功),统计建模成功瘢痕数量进行在建模后六周进行第一次激光治疗。建模成功瘢痕随机分为4组:①对照组。②浅层次高密度点阵激光治疗组。使用机器治疗参数为sizel,7%,60w,960mj/piexl(深度<1mm,108piexl/cm2,103.6J/cm2)。③深层次低密度点阵激光治疗组。使用机器治疗参数为size3,3%,60W,2800mj/piexl(深度>2.5mm,36piexl/cm2,100.8J/cm2)。④深浅层次联合治疗组。②③④组分别于FRDP植皮后瘢痕建模成功后6周进行第一次激光治疗,共治疗两次,每次间隔6周,对照组未予任何处理。二.数据收集1.主观评分数据于对照组建模后第18周,各激光治疗组激光治疗2次后6周对各组瘢痕的外观使用温哥华评分量表进行主观评估,并统计数据。2.客观测量数据于激光前,第一次激光治疗后3周,后6周,第二次激光治疗后3周,后6周观察并记录瘢痕厚度,瘢痕面积,硬度,平整度,颜色的改变,同时采集组织样本,通过客观检测仪器检测各组瘢痕的厚度,面积,硬度,平整度与颜色。统计各时间点各组客观测量数据,分析各激光治疗模式治疗两次后的疗效差异并观察各组病理切片检测瘢痕学组织特点,以及各项客观指标随时间的变化情况。三.数据分析本实验各项数值结果均使用SPSS软件进行统计分析,各组计量数据以X±S表示,每组数据先进行正态性检验与方差齐性分析,数据呈正态分布且方差齐时两两组间对比采用独立样本t检验。数据不符合正态分布或方差不齐者组间数据以非参数检验进行分析,两两组间对比采用Mann-Whitney U秩和检验。以P<0.05认为具有统计学意义。实验结果:一.FRDP植皮后瘢痕建模结果本次建模共建模32块,建模成功26块,建模成功率81.3%,自建模后2周敷料拆除至建模成功后18周,对照组厚度与瘢痕面积无明显变化,硬度逐渐增加,平整度逐渐降低,并逐渐出现色素沉着,组织学可见瘢痕纤维束的逐渐增粗与无序化,以及炎性细胞浸润的减少。二.不同模式CO2点阵激光治疗FRDP植皮后瘢痕两次后的疗效差异1.主观评估结果在建模后18周/激光治疗两次后6周,各组温哥华评分均值(数值越小越接近正常皮肤)为:①对照组8.17±1.47,②浅层次高密度组7.67±0.81,③深层次低密度组5.14±1.07,④联合治疗组4.86±0.69。③④组与①组相比有显著性差异。进一步分析结果我们可知③④组色泽与柔软度均值评分均明显低于①组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.客观数据测量结果①瘢痕厚度:深层次低密度模式与联合治疗模式导致暂时性的,持续时间较长的组织水肿。在建模后18周/激光治疗两次后6周,激光导致的暂时性的水肿消失后,各组瘢痕厚度为:①对照组0.327±0.061cm②浅层次高密度组0.339±0.060cm③深层次低密度组0.338±0.056cm④联合治疗组0.318±0.056cm。各激光治疗组与对照组间均无显著差异(P>0.05)。②瘢痕面积:在FRDP植皮后瘢痕成熟的过程中,皮片区域会先发生面积挛缩然后趋于稳定。在建模后18周/激光治疗两次后6周,各组瘢痕平均面积为:①对照组683.3±119.3mm2②浅层次高密度组697.5±189.9mm2③深层次低密度组769.4± 160.8mm2④联合治疗组796.5±159.8mm2。③组较①组平均面积增加86.1mm2,④组较①组平均面积增加113.2mm2,差异有统计学意义(P<0.05)。③④组间差无统计学差异,①②组间无统计学差异(P>0.05)。③瘢痕弹性:建模后18周/激光治疗两次后6周,各组瘢痕弹性指数R2(R2越接近1代表弹性越好)平均值为:①对照组0.573±0.176②浅层次高密度组0.593±0.245③深层次低密度组0.828±0.182④联合治疗组0.818 ±0.165。③组较①组平均R2值提高0.255,④组较①组平均R2值提高0.245,差异有统计学意义(P<0.05),③④组间差无统计学差异,①②组间无统计学差异(P>0.05)。④瘢痕平整度:在激光治疗两次后6周,深层次低密度组的瘢痕平整度明显增加,各组大皮褶(皮褶高度3.49mm,突起宽度>1mm,长度>3mm)均值数目为:①对照组2.00±0.89②浅层次高密度组1.83±0.75③深层次低密度组0.57±0.53④联合治疗组0.44±0.16。③组较①组平均大皮褶数目减少1.33,④组较①组平均大皮褶数目减少1.46,差异有统计学意义(P<0.05),③④组间差无统计学差异,①②组间无统计学差异(P>0.05)。进一步分析③④组图像可得两组小皱纹(皱纹深度1.35mm,凹陷宽度>0.5mm,长度>2mm)数目为:③深层次低密度组2.14±1.07④联合治疗组0.71 ±0.49。两次激光治疗后联合治疗组较深层次低密度组平均小皱纹条数减少1.43,百分比减少66.8%,数值有统计学差异(P<0.05)。联合治疗组的平整度较深层次低密度组更高。⑤色素颜色:激光治疗两次后6周,建模后18周/激光治疗两次后6周,各组黑色素指数(MI)平均值为:①对照组815.8±20.9②浅层次高密度组810.8±14.5③深层次低密度组808.4±16.1④联合治疗组793.875±10.8。③组较①组平均MI值下降7.4,④组较①组平均MI值下降21.92,差异有统计学意义(P<0.05),③④组间无统计学差异,①②组间无统计学差异(P>0.05)。⑥组织学:CO2点阵激光可以使瘢痕组织中粗大的条索状胶原束在治疗后变为更为有序,结构更为紧凑的网状纤维束,其胶原纤维变化区域与治疗区域基本重合,浅层次高密度治疗模式下的瘢痕组织深部胶原分布情况无变化。实验结论:从本次研究实验结果中可以得出结论,在本实验的能量范围内,激光治疗对非增生性瘢痕的瘢痕厚度无影响。对植皮后瘢痕进行治疗时,单独使用浅层次高密度的CO2点阵激光只能轻度改善瘢痕色泽,而单独使用深层次低密度的CO2阵激光则能够明显减少瘢痕的面积挛缩,大幅度改善瘢痕色泽,提高瘢痕的弹性与平整度。此外,在应用深层次CO2点阵激光的同时联用浅层次CO2点阵激光,还能够进一步提高瘢痕平整度。此结果对如何根据瘢痕的病理特征选择不同的治疗模式有一定指导意义,能够为临床上面对不同种类的瘢痕制定相应的激光治疗策略提供依据。