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目的：将腺病毒Ad5F35-GFP对4种不同细胞的转染效率与Ad5-GFP和pEGFP-N1进行比较，以获得腺病毒Ad5F35-GFP适用的细胞种类及各类细胞适用的转染方法。构建携带人白介素-12（IL-12）的重组腺病毒，观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。用携带IL-12的腺病毒感染单核细胞，观察在肿瘤微环境下对肿瘤相关巨噬细胞形成的影响。方法：采用携有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）基因的腺病毒Ad5F35-GFP、腺病毒Ad5-GFP和质粒pEGFP-N13种载体，分别转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562、人外周血单个核细胞、小鼠脂肪细胞株3T3-L1和小鼠肝癌细胞系Hep A1-6。转染48h后，倒置荧光显微镜下观察GFP的表达，RT-PCR检测GFP的mRNA表达情况。PCR扩增IL-12基因，构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12；穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier cell，E.coli BJ5183内同源重组；PacⅠ酶切重组腺病毒质粒，转染AD293，包装病毒；病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B，以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达；MTT法检测肝癌细胞的增殖情况；RT-PCR检测转化生长因子-β（TGF-β）的表达。以携带IL-12的腺病毒pAd-IL-12感染单核细胞，与Hep3B间接共培养，流式细胞术检测CD206的表达量，反映肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages，TAM）的形成情况。。结果：Ad5F35-GFP转染K562、人外周血单核细胞效率较高，但不能有效地转染小鼠细胞；3种载体均不能有效地转染3T3-L1细胞；Ad5-GFP和pEGFP-N1转染Hep A1-6细胞效率都较高。Xho I、Kpn I双酶切后琼脂糖凝胶电泳及测序表明，成功构建携IL-12基因的重组质粒，并成功包装了可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12；RT-PCR以及Western blot结果表明，病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高效表达白介素12，并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低（P＜0.05），TGF-β表达量也降低（P＜0.05）。pAd-IL-12感染单核细胞组CD206的表达量低于空白组和空载组，说明TAM生成减少。结论：Ad5F35-GFP可高效转染人造血细胞和单核细胞，为相关研究及基因治疗奠定了基础。可高表达IL-12的腺病毒包装成功，感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖，同时也下调TGF-β的表达；肿瘤环境中感染pAd-IL-12单核细胞TAM的形成减少。为进一步研究利用IL-12靶向逆转TAM，防治肿瘤提供了基础。