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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是导致1992年以来世界性对虾爆发性死亡的主要病原,至今仍给我国对虾养殖业带来重大经济损失。目前对WSSV的研究主要集中于寻找WSSV与宿主相结合的粘附蛋白上,从而研制相应的阻断疫苗以达到防治目的。以前研究表明VP36A(以表观分子量命名)是WSSV中含量很少的一个囊膜蛋白,含有RGD (Arg-Gly-Asp)细胞粘附序列,本实验室用噬菌体展示技术研究发现,VP36A与虾鳃细胞膜有结合活性,还可与WSSV竞争结合对虾鳃细胞膜,提示VP36A可能是WSSV的一个粘附蛋白。本文在此基础上用原核表达的VP36A用ELISA、细胞培养、免疫印迹等技术继续研究其功能。本实验基于中国株WSSV的vp36a基因设计了一对引物,并引入NheI和HindⅢ酶切位点,PCR扩增出VP36A的基因片段,定向克隆至原核表达质粒pBADgⅢB,经酶切、菌落PCR鉴定后测序,表明成功构建了原核表达载体pBADgⅢB-VP36Ao将重组质粒转化进大肠杆菌后经L-阿拉伯糖浓度梯度和不同时间诱导优化表达条件,最后确定用0.2%L-阿拉伯糖诱导4h,SDS-PAGE和Western Blot分析在菌体裂解沉淀中可见40KD左右的特异性条带,表明重组VP36A以包涵体形式在大肠杆菌中得到了成功表达。大量发酵Top10-pBADgⅢB-VP36A菌体,用金属螯合亲和层析柱对rVP36A进行了纯化以继续后续研究。从VP36A序列中选取抗原性较高的两段氨基酸序列,分别合成小肽并免疫新西兰大白兔,得到抗血清经亲和层析纯化,ELISA法检测抗体效价均达到1：10000。用纯化的抗体对重组VP36A进行Western Blot分析,呈现特异性条带,表明所制备抗体对重组VP36A均具有良好抗体反应活性；但对病毒中的天然VP36A没有预期的反应条带,其原因有待于进一步研究。用ELISA结合实验和荧光显微镜法分别验证了VP36A与对虾鳃细胞膜、血淋巴细胞具有结合活性。进一步用Far Western Blot从虾鳃细胞膜蛋白和WSSV结构蛋白中钓取与VP36A相互作用的蛋白,结果表明WSSV的一个结构蛋白可能与VP36A结合,对虾鳃细胞膜的一个32KD左右蛋白可能与VP36A结合。这两个蛋白需要进一步用质谱鉴定。本研究表明一个WSSV蛋白和一个对虾鳃细胞膜蛋白和VP36A有结合作用,下一步需进行蛋白鉴定并验证其结合作用,以期为WSSV的分子病毒机制研究提供一定的理论基础。