论文部分内容阅读
目的:本文旨在探讨参与γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）分解代谢的γ-氨基丁酸转氨酶（γ-aminobutyric acid transaminase,GABA-T）及其基因在不同发育阶段雌性大鼠生殖轴中的表达规律,以及抑制GABA-T对SD雌性大鼠初情期和繁殖性能的影响,为雌性动物生殖调控提供科学的理论依据。方法:选取不同发育阶段（幼儿期,10 d）、初情期前（21 d和28d）、初情期（33.67±0.49 d）和成年间情期（64.16±0.79 d）的雌性大鼠,采用免疫荧光和RT-q PCR检测GABA-T及其基因在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达;培养下丘脑神经元并添加GABA-T抑制剂（vigabatrin）,运用RT-q PCR检测其对生殖相关基因表达的影响;给初情期前（25 d,n=36）和成年间情期（65 d左右,n=32）大鼠侧脑室注射（intracerebroventricular injection,ICV injection）vigabatrin,观察其中24只初情期前大鼠阴门开启时间的变化并在阴门开启时处死,12只初情期前和12只成年间情期大鼠注射vigabatrin 4 h后处死,采集血液分离血清、下丘脑、垂体和左侧卵巢于-80℃保存,用ELISA检测血清激素水平,用RT-q PCR检测生殖轴生殖相关基因转录水平,对右侧卵巢称重并观察组织学变化;阴道涂片观察剩余20只成年间情期大鼠发情周期和交配时间变化,分析大鼠产仔性能和哺乳性能。结果:（1）在下丘脑中,GABA-T主要分布于弓状核（arcuate nucleus,ARC）、室旁核（paraventricular nucleus,PVN）和室周核（periventricular nucleus,Pe N）,且在这三个核团中,初情期时GABA-T荧光强度最高（P<0.01）;与成年期相比,Abat m RNA转录水平在幼儿期、初情期前（28 d）和初情期极显著降低（P<0.01）,在初情期前（21 d）显著降低（P<0.05）;且幼儿期和初情期前（28 d）Abat m RNA转录水平极显著低于初情期前（21 d）和初情期（P<0.01）。在垂体中,GABA-T主要分布于腺垂体,且GABA-T荧光强度在初情期最低（P<0.01）,在初情期前（21 d）最高（P<0.01）;初情期前（28 d）Abat m RNA转录水平最低,极显著低于幼儿期、初情期前（21 d）、初情期和成年期（P<0.01）;在幼儿期和初情期Abat m RNA的转录水平无显著差异（P>0.05）,与这两个时期相比,初情期前（21 d）和成年期的Abat m RNA的转录水平极显著降低（P<0.01）;在卵巢中,GABA-T主要分布于卵母细胞和颗粒细胞,且GABA-T荧光信号在成年期最强（P<0.05）,在初情期前（21 d）最弱（P<0.05）,但Abat m RNA转录水平却最高（P<0.01）;幼儿期Abat m RNA转录水平显著高于初情期前（28 d）（P<0.05）、初情期和成年期（P<0.01）,但初情期前（28d）,初情期和成年期Abat m RNA转录水平无显著差异（P>0.05）。（2）下丘脑神经元添加vigabatrin后,与对照组相比,25μg/m L和50μg/m L组的Abat m RNA和Rfrp-3 m RNA转录水平极显著降低（P<0.01）,Gnrh m RNA转录水平极显著增加（P<0.01）;且50μg/m L组的Kiss1 m RNA转录水平增加（P<0.05）但Gabbr1 m RNA转录水平降低（P<0.05）,而25μg/m L组的Kiss1 m RNA和Gabbr1m RNA无显著变化（P>0.05）。（3）初情期前（25 d）大鼠侧脑室注射1μg/g和2μg/g vigabatrin均显著推迟大鼠初情期启动时间（P<0.05）;与对照组相比,均显著降低下丘脑中Abat m RNA（P<0.05）水平,血清中GABA-T和LH（P<0.01）和P4浓度（P<0.05）,增加下丘脑中Rfrp-3 m RNA转录水平（P<0.01）;但是1μg/g组下丘脑中Kiss1 m RNA（P<0.05）和Gnrh m RNA（P<0.01）转录水平显著降低（P<0.05）;2μg/g组的Kiss1 m RNA转录水平极显著降低（P<0.01）;卵巢组织学观察显示抑制剂组和对照组中均存在黄体和次级卵泡,但1μg/g组中次级卵泡较多,卵巢指数显著低于对照组（P<0.05）;2μg/g组黄体形态更大,且具有较多的初级卵泡,卵巢指数与对照组之间无显著差异（P>0.05）。（4）成年间情期大鼠侧脑室注射vigabatrin后发情周期紊乱,交配时间、妊娠期和产仔性能没有变化,仔鼠体重降低（P<0.05）。（5）侧脑室注射vigabatrin后4 h,初情期前（25 d）和成年间情期大鼠生殖轴中Abat、Rfrp-3、Kiss1、Gnrh和Gabbr1 m RNA的转录水平没有显著变化（P>0.05）;但血清激素浓度发生改变,在初情期前（25 d）大鼠中,GABA-T（P<0.01）和LH（P<0.05）浓度显著降低,FSH浓度极显著增加（P<0.01）;在成年大鼠中,GABA-T和LH浓度均极显著降低（P<0.01）。结论:（1）在雌性大鼠不同发育阶段,GABA-T在下丘脑、垂体、卵巢中均有表达;且Abat m RNA转录水平随着大鼠的发育发生改变。（2）体内和体外抑制GABA-T均改变了Rfrp-3、Gnrh和Kiss1 m RNA转录水平,但体内和体外结果相反;体内抑制GABA-T延迟初情期启动并改变血清中GABA-T、LH和P4的浓度。（3）抑制GABA-T导致成年雌性大鼠发情周期紊乱,并对哺乳性能产生影响。（4）短暂抑制GABA-T对生殖轴Abat、Rfrp-3、Kiss1、Gnrh和Gabbr1 m RNA的转录水平没有影响,但可以改变血清中GABA-T、LH和FSH的浓度。