【摘 要】
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目的:本论文目的在于筛选鹿血酶解肽类成分中可以治疗心力衰竭的最佳活性组分,解析出最佳活性组分所对应的化合物;并对鹿血中最佳活性组分进行网络药理学与分子对接,验证其作用机制,以及对鹿血肽的相关产品进行开发。方法:1、采用不同极性的溶剂萃取,对鹿血进行全成分分析,运用MTT法,筛选出对受损伤的H9c2大鼠心肌细胞增殖抑制效果最好的活性部位及鹿血肽最佳提取方法;2、响应面法得到鹿血酶解肽的最佳酶解工艺,
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目的:本论文目的在于筛选鹿血酶解肽类成分中可以治疗心力衰竭的最佳活性组分,解析出最佳活性组分所对应的化合物;并对鹿血中最佳活性组分进行网络药理学与分子对接,验证其作用机制,以及对鹿血肽的相关产品进行开发。方法:1、采用不同极性的溶剂萃取,对鹿血进行全成分分析,运用MTT法,筛选出对受损伤的H9c2大鼠心肌细胞增殖抑制效果最好的活性部位及鹿血肽最佳提取方法;2、响应面法得到鹿血酶解肽的最佳酶解工艺,将得到的鹿血酶解肽超滤分级,得到五组分子量不同的组分（总提物、＞10 k Da、3～10 k Da、1～3 k Da、＜1 k Da）,MTT法检测各组分对受损伤的H9c2细胞增殖抑制率的影响,筛选抑制效果最好的组分,测定其对受损伤的H9c2细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β三种炎症因子的影响以及对受损的H9c2细胞凋亡情况的影响;3、利用氨基酸分析仪分析鹿血酶解肽＜1 k Da组分的氨基酸组成;4、采用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离纯化鹿血最佳活性组分,通过液质联用技术解析出其可能的氨基酸序列;5、采用网络药理学与分子对接的方法预测鹿血中最佳活性组分治疗心力衰竭的作用机制;6、采用鹿血酶解肽、山楂、黄芪、白术、茯苓、人参制备人参鹿血肽强心颗粒型固体饮料。结果:1、全成分分析后得出最佳提取溶剂为水;2、最佳提取方法为酶解法,最佳酶解工艺为:碱性蛋白酶,p H 10.4、酶解时间5 h、酶解温度52℃、酶量4400 U/g。该条件下水解度达到28.98%;3、不同分子量的DBP在200μg/m L浓度下,对受损伤的H9c2细胞增殖抑制效果最好,和受LPS损伤的模型组比较,其他给药组均可使受损伤的H9c2细胞增殖率下降（P＜0.05）,＜1 k Da寡肽组分（DBP-5）对受损伤的H9c2细胞增殖抑制作用最好,有显著性差异（P＜0.05）。在DBP-5浓度达到200μg/m L时,对于减少受损伤的H9c2细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β的效果最好（P＜0.05）,且在此浓度下,受损伤的H9c2细胞增殖抑制率最大;4、对DBP-5寡肽组分进行氨基酸分析,共分析出17种氨基酸;5、应用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离＜1 k Da寡肽组分（DBP-5）,采用液质联用技术进行结构解析,共解析出了6个氨基酸序列;6、共获得44个鹿血治疗心力衰竭的潜在作用靶点。KEGG通路分析共得到钙信号通路、癌症信号通路、细胞凋亡等12条重要信号通路。分子对接显示Phe-Leu、Phe-ILe与5种心力衰竭关键靶蛋白均有较好的对接能力;7、人参鹿血肽强心颗粒型固体饮料最佳制备工艺为:提取2 h,提取2次,10倍量水。选择麦芽糊精为辅料,浸膏粉与辅料混合比例为1:0.8。结论:实验筛选出鹿血治疗心力衰竭的最佳组分为＜1 KDa寡肽组分（DBP-5）,分离纯化后共解析出6种鹿血寡肽。网络药理学获得了44个鹿血治疗心力衰竭的靶点,这些基因主要与细胞凋亡等信号通路有关。为鹿血治疗心力衰竭以及进行鹿血相关产品的开发奠定了基础。
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