背景:肾癌即肾细胞癌(renal cell carcinoma),是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其起源于肾实质泌尿小管上皮系统,占肾脏恶性肿瘤的80%～90%,发病率约占全身肿瘤的2.1%。近年来由于吸烟、饮食变化等原因,肾癌发病率有逐渐上升的趋势。肾癌易进展,预后差,且其分子机制尚不明确。阐明肾癌发生发展的生物学机制,对于肾癌早期诊断及治疗具有重要的临床意义。microRNAs(miRNAs)是一类由内源性基因编码的非编码RNA,通过靶向基因mRNA3’端非编码区调控基因表达。研究表明miRNAs如miR-501-3p参与肿瘤的发生发展,过表达miR-501-3p可抑制前列腺癌细胞增殖和集落形成,并诱导细胞周期G1期阻滞。miR-501-3p在肺癌、大肠癌、胰腺导管腺癌等肿瘤中也有促癌或抑癌作用。但miR-501-3p在肾癌中的表达模式及其生物学功能仍缺乏系统性研究,其对肾癌细胞增殖、迁移的影响及其分子机制尚不明确。目的:通过生物信息学网站分析miR-501-3p在肾癌中的表达模式并分析其表达下调的表观遗传学机制。采用一系列功能实验探究miR-501-3p在肾癌中的生物学功能。利用生物信息学网站预测以及双荧光素酶报告基因实验验证miR-501-3p在肾癌中的直接靶基因。分析靶基因在肾癌中的生物学功能,阐述miR-501-3p对其调控的机制,并探索下游分子通路。方法:1.通过生物信息学网站分析miR-501-3p在肾癌中的表达模式并分析miR-501-3p表达下调是否与其启动子区域CpG岛异常甲基化相关。2.转染miR-501-3pmimic上调肾癌细胞786-O和Caki-1细胞株的miR-501-3p表达量。通过CCK-8实验、流式细胞周期检测、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验探究miR-501-3p对肾癌细胞增殖与迁移能力的影响。3.利用生物信息学网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-501-3p在肾癌中的靶基因。通过CCK-8实验、流式细胞周期检测、平板克隆形成实验、Trans well迁移实验探究靶基因对肾癌细胞增殖与迁移能力的影响。4.通过拯救实验、m6A Dot Blot实验探究miR-501-3p与靶基因之间的调控关系和作用机制。结果:1.我们发现miR-501-3p在肾癌组织中较正常组织表达明显降低。但miR-501-3p转录起始位点前后约5000bp区域内未找到CpG岛,我们推测miR-501-3p在肾癌中低表达与启动子区域异常甲基化无关。2.过表达miR-501-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成、迁移的能力,同时诱导肾癌细胞G1期阻滞。3.我们通过生物信息学网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实WTAP是miR-501-3p在肾癌中的靶基因。4.我们发现WTAP在肾癌组织中较正常组织表达明显增高。敲低WTAP可显著抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成以及细胞迁移,但可诱导肾癌细胞G1期阻滞。WTAP主要通过下游分子CDK2调节肾癌细胞周期。5.拯救实验证实过表达miR-501-3p可有效抑制WTAP诱导的肾癌细胞增殖与迁移。m6A Dot Blot实验证实敲低WTAP或过表达miR-501-3p均可下调肾癌细胞的m6A表达水平。但我们未在CDK2mRNA上找到m6A修饰位点,因此我们推测m6A修饰并不是miR-501-3p/WTAP/CDK2轴影响肾癌的作用机制。结论:miR-501-3p在肾癌细胞中显著低表达,过表达miR-501-3p可诱导肾癌细胞G1期阻滞从而抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成。miR-501-3p在肾癌中的靶基因是WTAP。最终我们发现miR-501-3p/WTAP/CDK2作为调控轴参与肿瘤进展,为肾癌的发生发展机制提出新的理论。