骨髓基质细胞(BMSCs)复合富血小板血浆(PRP)促进牙周组织再生的动物实验研究

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目的:①体外分离、扩增狗骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)。②体外制备狗富血小板血浆(Platelet-Rich Plasma,PRP)并观测PRP对BMSCs的生物学影响,评价PRP的生物学特性。③评估BMSCs、PRP及其复合物治疗狗牙周骨缺损的再生效果,初步探讨组织工程学方法用于牙周组织再生的可行性。 方法:①抽取狗髂骨骨髓,梯度离心法分离、扩增骨髓基质细胞。②抽取狗静脉全血两次离心,获取富血小板血浆PRP。应用MTT比色法,检测PRP对BMSCs的促增殖作用。应用免疫组化染色,酶动力学法和考马斯亮蓝法探讨PRP对BMSCs碱性磷酸酶活性和总蛋白含量的影响,考查PRP对BMSCs分化的影响。③以磷酸三钙(Tricalcium Phosphate,TCP)为载体,将BMSCs、PRP及其复合物植入狗人造牙周骨缺损中。实验分组:TCP组,PRP/TCP组,BMSCs/TCP组,BMSCs/PRP/TCP组,同时以翻瓣术作为对照组。术后6周和12周,动物颈动脉灌注取材,常规固定、脱钙、脱水、包埋、浸蜡、切片,行组织学观察和测量。 结果:所有实验组在术后6周和12周均有不同程度的牙周组织再生,而对照组只有很少量牙周组织再生。当缺损植入PRP时,能促进牙槽骨的再生和加速骨的成熟,但不能促进牙骨质的再生。当BMSCs单独或与PRP联合植入缺损时,有明显的牙周组织再生,包括牙槽骨、牙周膜和牙骨质的再生,尤以术后12周非细胞性牙骨质再生为特点。 结论:①植入术区的BMSCs,在体内微环境作用下,可分化形成包括牙牙骨质在内的所有牙周组织,PRP可以加速这种再生作用,以非细胞性第一军医大李硕士学位伦灰牙骨质形成为特点。②P即单独使用时可以促进牙槽骨的再生,加速骨形成和促进骨成熟,但它不能促进牙骨质的再生。③利用组织工程学的方法,BMSCS和P即的联合应用可以加速包括非细胞性牙骨质在内的所有牙周组织再生,为牙周组织再生提供了一种新的治疗方式。
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