多不饱和脂肪酸高产菌株的选育及发酵研究

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多不饱和脂肪酸(PUFAs)具有维护膜结构、抑制心血管疾病、抗炎、防癌以及促进大脑发育、减肥、提高动物的产仔率和成活率等功能,在食品、医药、养殖、化妆品等行业中应用广泛。深黄被孢霉是目前研究最广泛,最有潜力实现PUFAs大规模工业化生产的微生物资源,但仍存在菌种产量低、发酵工艺不完善、油脂提取率低等问题。本研究围绕提高PUFAs产量的核心问题,对PUFAs高产菌株的选育、微生物油脂最佳提取工艺、培养基组分及发酵条件的优化进行了系统的研究。主要得到以下研究结果:1.本研究通过紫外线和亚硝基胍联合诱变、乙酰水杨酸推理筛选,获得高产菌株N0.1-112。菌株N0.1-112生长能力和产油能力较强,其生物量为24.71g/L、油脂产量为20.02g/L, PUFAs产量为4.67g/L,分别比原始出发菌株提高202.45%、580.06%和267.72%,且遗传稳定。2.本研究分别采用超声波辅助酸热提取法和超声波微波联合提取法两种提取方法,对微生物油脂的提取条件进行了研究,确定各自最佳的提取工艺。通过两种工艺比较,最终确定超声波微波联合提取法为微生物油脂最佳提取方法。最佳工艺为:微波功率400W,微波时间3.7min,超声温度30℃C,超声时间40.5min,超声功率498W,料液比1:12.3(w/v),在此条件下,微生物油脂的提取率达到92.24%,提取量达178.73±0.17mg/g(湿菌)(P<0.05),是优化前的1.65倍。3.在单因素实验结果基础上,通过B-B试验设计对培养基组分和发酵条件进行了优化,确定了最优的培养基组分和发酵条件。最佳的发酵培养基组分分别为:2g/L KH2PO4,2g/L柠檬酸钠,116g/L葡萄糖,10.8g/L酵母浸膏与花生饼粉混合氮源,比例为3:1(w/w),30.8mg/L Ca2+,96.8mg/L Mg2+在此条件下PUFAs产量达到6.27g/L;最佳发酵条件组合分别为:初始pH值6.36,培养温度28℃,接种量10%,装液量117ml/500m1,摇床转速200r/min,该条件下PUFAs产量高达7.03g/L。
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