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目的通过研究TAp73α/TAp73β和DLC2在胶质瘤标本及胶质瘤细胞系中的表达情况、两者相关性以及发挥的作用,探讨胶质瘤中DLC2通过调控TAp73α/TAp73β从而发挥抑癌作用的机制。方法1.WB（Western Blot）检测不同级别胶质瘤样本及胶质瘤细胞系（A172,T98G,U251,Shg44）中TAp73α、TAp73β的表达,验证它们与胶质瘤级别及胶质瘤细胞系克隆形成的相关性;2.在U251和Shg44细胞中过表达TAp73β,流式细胞学技术检测细胞凋亡变化,WB检测凋亡相关蛋白Caspase3、BAX等变化;在A172及T98G细胞中过表达TAp73α、TAp73β,检测对细胞克隆形成的影响;WB检测Caspase3、BAX等蛋白变化;3.WB、RT-q PCR检测不同级别胶质瘤样本与正常脑组织中DLC2蛋白及m RNA的表达,基于REMBRANDT和TCGA数据集分析不同级别胶质瘤中DLC2蛋白及m RNA的表达;同时,分析DLC2与TAp73α、TAp73β表达,以及TAp73α/TAp73β比值的相关性;4.WB检测胶质瘤细胞系（A172,T98G,U251,Shg44）中DLC2的表达;在U251及Shg44中过表达DLC2后,流式细胞学技术检测细胞凋亡的改变;将DLC2过表达的U251及Shg44注射至裸鼠皮下,构建胶质瘤异位肿瘤模型,对比对照组与DLC2过表达组肿瘤的生长情况;将A172及T98G细胞敲减DLC2后,细胞克隆实验检测细胞集落形成情况;5.WB检测U251及Shg44细胞过表达DLC2后TAp73α、TAp73β及TP73下游靶基因Caspase3,BAX的表达;WB检测A172及T98G细胞敲减DLC2后TAp73α、TAp73β蛋白水平改变,RT-q PCR检测TAp73αm RNA变化;将MG132及不同量Myc-DLC2（0,0.5,1.0,1.5μg）处理U251及Shg44细胞,IP检测DLC2对内源性TAp73α的泛素化降解情况;将MG132,His-Ub,Flag-TAp73α及不同量Myc-DLC2（0,0.5,1.0,1.5μg）处理293T细胞,IP检测DLC2对外源性TAp73α的泛素化调控;6.在U251及Shg44中转染Myc-DLC2,IP检测DLC2与内源性TAp73α、TAp73β相互作用情况;在293T细胞中分别或联合转染Myc-DLC2,Flag-TAp73α,His-TAp73β,IP检测DLC2与外源性TAp73α、TAp73β结合情况;将Myc-DLC2,Myc-DLC2-d SAM及TAp73α转染293T细胞后,IP检测DLC2、SAM区域缺失的DLC2突变体与TAp73α相结合情况;用MG132、Myc-DLC2、Myc-DLC2-d SAM处理U251及Shg44细胞,IP检测DLC2及DLC2突变体对内源性TAp73α的泛素化降解情况;用MG132、His-Ub、Flag-TAp73α及Myc-DLC2或Myc-DLC2-d SAM转染293T细胞,IP检测DLC2和DLC2-d SAM对外源性TAp73α的泛素化降解作用;7.将DLC2-d SAM或DLC2过表达的U251及Shg44注射至裸鼠皮下,构建胶质瘤异位肿瘤模型,对比DLC2-SAM过表达组与DLC2过表达组肿瘤的生长情况;同时WB检测异位肿瘤模型来源的肿瘤组织中Caspase3及Bax的蛋白表达水平变化;TUNEL检测肿瘤组织中胶质瘤细胞的凋亡情况。结果1.WB显示胶质瘤组织中TAp73α表达明显高于正常脑组织,而TAp73β蛋白水平无明显变化;胶质瘤细胞系中TAp73α蛋白在U251及Shg44中表达高于A172及T98G细胞,并且细胞克隆实验证实U251、Shg44细胞集落形成多于A172、T98G细胞;2.流式细胞学技术证实TAp73β过表达促进U251及Shg44凋亡,凋亡相关指标如Caspase3、BAX蛋白表达水平升高;而在A172及T98G中过表达TAp73β,可以抑制细胞增殖,促进Caspase3、BAX的蛋白表达;但在A172及T98G中过表达TAp73α可以促进细胞增殖,抑制Caspase3、BAX的蛋白表达;3.与正常脑组织相比,胶质瘤组织中DLC2的蛋白及m RNA表达下降;并且与TAp73α表达负相关（p<0.001）,与TAp73β表达相关性不明显（p=0.442）,但与TAp73α/TAp73β比负相关（p<0.001）;4.WB提示DLC2在A172、T98G中表达高于U251、Shg44;而在U251、Shg44中过表达DLC2抑制细胞凋亡及体外成瘤实验中肿瘤的生长;敲减A172、T98G中DLC2可以促进细胞克隆形成;5.在U251、Shg44中过表达DLC2可以抑制TAp73α的蛋白表达,而m RNA表达无明显变化,同时促进TP73下游相关靶基因,如Caspase3、Bax的蛋白表达,而TAp73β表达不受影响;敲减A172、T98G中DLC2表达后TAp73α表达升高,TAp73β表达不受影响;DLC2可以抑制U251及Shg44细胞中内源性TAp73α以及23T细胞中外源性TAp73α的泛素化降解;6.在U251和Shg44中转染Myc-DLC2后,IP可以检测到DLC2与内源性TAp73α共沉淀,而DLC2与TAp73β未见共沉淀;在293T中共转染Myc-DLC2和Flag-TAp73α、His-TAp73β后,IP检测到DLC2可以与外源性TAp73α而非TAp73β共沉淀;而SAM结构域缺失的DLC2不能与TAp73α共沉淀,并且SAM结构域缺失的DLC2对TAp73α泛素化降解作用减弱;7.将DLC2、SAM区域缺失的DLC2突变体转染U251及Shg44细胞后,构建裸鼠异位胶质瘤模型,对比发现,DLC2过表达组肿瘤重量、体积均大于突变体转染组;WB检测发现突变组肿瘤组织中Caspase3及Bax表达较DLC2过表达组下降;组织TUNEL提示突变组凋亡少于DLC2过表达组。结论在胶质瘤组织中DLC2相对低表达,而TAp73α相对高表达,并且两者表达负性相关。DLC2通过SAM区域与TAp73α相互作用,并调节其泛素化降解,影响TP73下游基因的表达,从而在胶质瘤中发挥抑癌作用。