枯萎病是番茄的主要病害之一,该病害的发生可严重影响番茄的产量与品质。目前对该病害的防控主要靠化学防治,但化学药剂可导致环境污染、农药残留与农药抗性等一系列问题,因此安全有效的生物防治措施越来越受到人们的重视。分离、纯化并筛选具有强拮抗作用的放线菌是研发生物农药的基础。前人研究表明,放线菌可产生对植物病原菌具有强抑制作用的拮抗物质,且自然界中放线菌资源十分丰富。为筛选对番茄枯萎病菌具强拮抗作用的放线菌,进而开发成生物农药,本文采用平板对峙法和生长速率法筛选对番茄枯萎病菌具拮抗作用的放线菌,并通过形态特征和培养性状观察、生理生化特性分析以及分子生物学研究手段对筛选到的拮抗菌进行鉴定,优化了放线菌发酵条件,并初步测定了其代谢产物的性质,结果如下:1.筛选到8株对番茄枯萎病菌拮抗效果较强的放线菌,其中编号为2-1-2F-1的菌株综合拮抗效果最好,其对番茄枯萎病菌抑菌带宽达8.8 mm。该菌株抑菌谱广,对茭白胡麻叶斑病菌、草莓灰霉病菌、棉花枯萎病菌、葡萄炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、水稻恶苗病菌和猕猴桃溃疡病菌均有较好的抑制作用。菌液发酵5 d后,上清液对番茄枯萎病菌菌落生长的抑制率可达72.45%。2.菌株2-1-2F-1气生菌丝为淡紫灰色,多分枝,孢子丝直线形与螺旋形并存,孢子圆形或椭圆形,大小为1.2～4.7×0.6～1.2 μm;基内菌丝乳黄色;不产生可溶性色素,能液化明胶、水解淀粉、水解纤维素、凝固和胨化牛奶,不产生硫化氢,耐盐量为5%,能利用葡萄糖、果糖、肌醇、鼠李糖、阿拉伯糖,不能利用蔗糖、木糖、甘露醇、棉子糖。菌株16S rDNA序列与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)同源性为100%。综上所述,将菌株2-1-2F-1鉴定为淡紫灰链霉菌。3.发酵条件优化试验明确了菌株2-1-2F-1的最佳发酵条件:采用4号培养液(黄豆饼粉 10 g,葡萄糖 10 g,蛋白胨 3.0 g,NaCl 2.5 g,CaCO32.0 g,H2O 1 L,pH:7.0)进行发酵,每100 mL培养液中接种5块直径6 mm的菌饼,30℃下180 r/min发酵5 d。4.菌株2-1-2F-1产生的抑菌物质无挥发性,其发酵液的丙酮提取物能使病原菌菌丝变粗、断裂、菌丝顶端膨大呈球状。将提取物浓缩50倍,其抑菌带宽达13.5 mm。理化性质检测结果表明,抑菌物质含微量糖类物质,具有较强的极性,排除蛋白和脂类物质的可能。抑菌物质的抑制效果在pH值为11.0的条件下被钝化36.25%,但不受氯仿、蛋白酶和强酸影响。另外,提取物最大吸收峰波长为222 nm,核磁共振检测无峰值产生。