【摘 要】
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牦牛作为青藏高原上所特有可以抗高寒和耐低氧的牛种,是高海拔地区农牧业发展的重要物种。水通道蛋白1(Aquaporin1,AQP1)和水通道蛋白11(Aquaporin11,AQP11)是水通道蛋白家族(Aquaporins,AQPs)成员,在雄性动物精子生成、浓缩和运动等生殖过程中发挥着重要作用。然而,目前在国内外尚未见关于AQPs在雄性牦牛生殖器官中表达的报道。因此,我们选用不同发育阶段的牦牛睾
【基金项目】
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the National Natural Science Foundation of China (31972760); Gansu Provincial Department of Education Industry Support and Guidance Project (2019C-03);
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牦牛作为青藏高原上所特有可以抗高寒和耐低氧的牛种,是高海拔地区农牧业发展的重要物种。水通道蛋白1(Aquaporin1,AQP1)和水通道蛋白11(Aquaporin11,AQP11)是水通道蛋白家族(Aquaporins,AQPs)成员,在雄性动物精子生成、浓缩和运动等生殖过程中发挥着重要作用。然而,目前在国内外尚未见关于AQPs在雄性牦牛生殖器官中表达的报道。因此,我们选用不同发育阶段的牦牛睾丸为试验材料,分别采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western-blotting,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)等方法对牦牛AQP1与AQP11基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达和定位进行分析。结果如下:1.成功克隆获得到牦牛AQP1和AQP11基因的编码区序列(coding sequence,CDS),其Gen Bank登录号分别为:MN892521和MN892522。其中AQP1基因序列长度为703 bp,共编码161个氨基酸,分子量为32.16 KD,分子式为C769H1212N204O226S4;AQP11基因序列长度为462 bp,共编码144个氨基酸,分子量为29.78 KD,分子式为C710H1135N187O191S12,基因特征分析显示AQP1和AQP11基因具有高度保守性。2.AQP1基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中均有表达,其中青年时期表达量均最高,中年时期和老年时期次之,初生时期最低,整体呈现先上升后降低的趋势。AQP1蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达定位基本一致,主要分布在精子、精子细胞、各级精母细胞、睾丸间质细胞、支持细胞和管周肌样细胞。3.AQP11基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中均有表达,其中AQP11基因表达为青年时期表达最高,中年时期和老年时期次之,初生时期最低,整体呈现先上升后降低的趋势;AQP11蛋白表达为初生时期最低,青年时期、中年时期和老年时期表达差异不显著,整体呈现先上升后趋于平稳的趋势。AQP11蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达定位基本一致,主要分布在精子细胞、精子、支持细胞、间质细胞和管周肌样细胞。结果表明,AQP1和AQP11蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中均有表达,在不同发育阶段牦牛睾丸内表达部位相同,但在不同发育阶段睾丸中AQP1与AQP11基因和蛋白的表达水平均存在显著差异,推测其对雄性牦牛的发育调控具有重要生物学意义,为进一步阐明AQPs参与雄性哺乳动物生殖生理的作用机制提供了理论依据。
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