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天然免疫系统是由多种识别及效应分子组成的复杂的网络结构,通过模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR)如 Toll 样受体(Toll-like receptor,TLR)、甘露糖受体(Mannose receptor, MR)、清道夫受体(ScavengerReceptor,SR)、肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein, PGRP)、甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)等识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns, PAMPs),构成机体抗感染的第一道防线;并通过抗原提呈、提供共刺激信号及调节细胞因子和趋化因子的分泌,启动获得性免疫应答并指导应答的性质和强度。天然免疫对获得性免疫应答的指导作用特别是其分子机制,近年来一直是免疫学研究的热点之一 。清道夫受体A(SRA),也被称为CD204或巨噬细胞清道夫受体,是最早发现并克隆的具有结合低密度脂蛋白活性的清道夫受体家族成员。大量的研究表明SRA/CD204在动脉粥样硬化及宿主防御中发挥重要作用。此外,后期研究揭示了 SRA/CD204对内毒素休克、阿尔茨海默氏症及高氧性肺损伤具有保护作用。SRA/CD204主要表达在吞噬细胞或抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)上,如树突状细胞(dendritic cell, DC)和巨噬细胞(macrophage, MΦ)。这些专职APC利用PRRs感知环境中的应激信号或危险信号(如外来病原体、组织损伤和病理改变)介导内吞启动宿主免疫应答。最新研究证据表明PRRs(包括 TLRs, Fc 受体(Fc receptor, FcR),DEC-205 (CD205),DC-SIGN 及MR)在调节DC功能和维持免疫稳态及宿主免疫防御中发挥重要作用。事实上,早期研究表明针对SR进行抗原化学修饰能提高抗原的免疫原性。已有报道,一些SRs包括SRA/CD204介导了 APC对应激蛋白和相关抗原的摄取。然而,SRA/CD204在抗原提呈和获得性免疫应答中的具体作用机制还有待阐明。尽管SRA/CD204的意义在于介导配体结合和内吞,我们近期研究发现SRA/CD204能削弱肿瘤疫苗的免疫效应。敲除SRA/CD204能显著增强疫苗的抗肿瘤作用,其可能归因于DC功能增强和细胞毒性细胞的活化。已报道,SRA/CD204在可溶性抗原交叉提呈中能够下调DC激活CD8+ T细胞的能力,而且细胞相关抗原亦是如此。然而,目前尚不清楚SRA/CD204是否也影响DC激活抗原特异性CD4+ T细胞。为进一步研究SRA/CD204对获得性免疫的调节作用,本课题以T细胞为切入点,初步探索SRA/CD204对T细胞功能活性的影响及其分子机制。并利用Con A诱导的肝损伤模型探讨了 SRA/CD204在T细胞介导的自身免疫性疾病中的作用。第一章SRA减弱抗原提呈细胞的免疫刺激能力抑制CD4+ T细胞的活化SRA/CD204主要表达于APC (如DC和MΦ),参与多种生理和病理的过程如动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、内毒素性休克及宿主免疫防御和肿瘤的形成和发展。近年研究报道SRA/CD204可负向调节肿瘤疫苗的作用及其产生的抗肿瘤免疫效应。在本次研究中,我们首次报道SRA/CD204缺陷小鼠较野生型小鼠对OVA免疫的应答更强。OVA免疫SRA-/-小鼠的脾脏DC激活初始OT-Ⅱ细胞的能力要明显强于OVA免疫的WT小鼠脾脏DC,这表明SRA/CD204对DC介导T细胞活化起负向调节作用。令人惊奇的是,在有或无LPS预处理的情况下,抗原负载的SRA-/- DC均诱导较强的T细胞应答且这一效应并非由SRA/CD204的内吞特性决定的。SRA-/- DC接受抗CD40抗体和IFN-γ刺激后表达高水平的IL-12 p35。分子机制研究发现SRA/CD204抑制DC受抗CD40抗体和IFN-y刺激后STAT1、p38及NF-κB信号的活化。随后,我们从SRA-/-OT-Ⅱ小鼠体内分离脾细胞并给予OVA蛋白或OVA323-339抗原肽刺激,结果显示SRA-/- OT-Ⅱ小鼠脾细胞的增殖显著强于SRA+/+OT-Ⅱ小鼠脾细胞。综合以上,这些结果表明SRA/CD204可以抑制APC的信号活化影响其免疫刺激功能从而调节CD4+T细胞的活化。第二章SRA/CD204抑制T细胞受体信号阻断T细胞的活化T细胞受表达SRA/CD204的抗原提呈细胞刺激后增殖及活化水平均较弱而且在CD3/CD28共刺激T细胞活化体系中加入重组SRA/CD204蛋白可减弱T细胞的活化和增殖。研究发现重组SRA/CD204蛋白可以结合活化T细胞而非初始T细胞。利用抗SRA/CD204特异性单克隆抗体可以阻断其在体外与T细胞的结合从而促进T细胞的活化。无论是体外或体外T细胞活化过程中,反应体系中的抗原提呈细胞表面SRA/CD204水平显著上调。SRA/CD204蛋白可抑制CD3/CD28共刺激T细胞活化过程中ζ-链相关的70 kD蛋白和活化T细胞接头蛋白及核转录因子-kappa B的活化,T细胞活化过程中的Ca2+信号也受到SRA/CD204蛋白的明显抑制。总而言之,本部分研究确定了 SRA/CD204是T细胞活化中的负向调节分子进一步研究将探讨其共刺激分子活性。第三章SRA/CD204抑制T细胞的活化对Con A诱导的肝损伤具有保护作用负向免疫调控机制对于维持肝脏内环境的自稳和预防免疫系统活化介导肝损伤具有重要作用。我们发现SRA/CD204在患有自身免疫性肝炎或病毒性肝炎病人或刀豆素A (ConA)诱导小鼠急性肝炎模型(CIH)的肝组织中高表达。SRA-/-小鼠对ConA诱导的肝损伤较为敏感,表现为IFN-γ的高水平分泌及T细胞的过度活化。在ConA诱导的肝炎模型中,SRA/CD204的增加主要集中于肝组织浸润的髓系来源细胞(如CD11b+Gr-1+ MDSC)。我们研究证明SRA/CD204可抑制T细胞活化及细胞因子分泌。小鼠过继转移SRA+/+肝脏单个核细胞或者慢病毒过表达SRA/CD204都能有效缓解Con A诱导的肝损伤更加证实了 SRA/CD204在CIH中的重要作用。我们首次报道CIH疾病模型中可溶型SRA/CD204的分泌及其对T细胞活化的抑制。给予小鼠SRA/CD204蛋白能有效减轻Con A诱导的肝损伤。我们的实验结果证明SRA/CD204通过抑制T细胞的活化从而减弱Con A诱导的肝损伤,表明SRA/CD204在维持肝组织免疫微环境的稳定中扮演着重要作用。综上,本课题研究发现SRA/CD204可抑制T细胞的增殖及相关细胞因子的分泌,并提出SRA/CD204可以通过抑制T细胞活化在Con A诱导的小鼠肝损伤中发挥保护作用。本研究将为SRA/CD204参与天然免疫及其指导获得性免疫应答的基础理论提供实验依据,并为SRA/CD204和T细胞功能紊乱有关疾病的诊治研究提供新的研究基础。