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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),是主要由禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌产生的B类单端孢霉烯毒素。主要污染小麦、大麦、燕麦、玉米等,是自然界污染率最高的毒素之一。食品中主要有脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(DON-3-G)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-15-葡萄糖苷(DON-15-G)、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-A-DON)、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-A-DON)和去环氧化脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DOM-1)。由于其细胞毒性、遗传毒性、免疫毒性等危害以及高的污染率,人们对其内暴露水平的关注也日益增多。本研究针对人群内暴露评估的需求,开展了尿液中生物标志物分析方法的建立、含量检测以及内暴露评估研究。1.本研究建立了尿液样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物标志物的两种分析方法。第一种,建立了应用IAC-UPLC-MS/MS技术检测尿液中DON和DOM-1的分析方法,采用不酶解和酶解过夜分别检测游离态DONs和总DONs。尿液上清液经免疫亲和柱净化,氮吹后进UPLC-MS/MS分析,采用同位素稀释内标法定量。该方法对于DON和DOM-1的方法回收率为83%-100%,平行样重复测定的RSD在0.8%-9.5%之间,前处理回收率分别为95%和136%。定量限分别为0.1μg/L和0.02μg/L。可见,该方法准确可靠,灵敏度高,可以用于检测较低水平含量的尿液样本。第二种,应用高通量-UPLC-MS/MS方法检测尿液中DON、DOM-1、DON-3-G、3-A-DON和15-A-DON。样品经酶解(酶量为2000U/mL urine)或不酶解(同体积缓冲液稀释),分别检测总DONs和游离态DONs。上清液经Oasis Prime HLB 96孔板净化(水洗杂质、甲醇洗脱),洗脱液直接稀释5倍,进UPLC-MS/MS分析,采用同位素稀释内标法定量。DON、DOM-1、3-A-DON、15-A-DON和DON-3-G的方法回收率分别为94%-112%、80%-91%、100%-102%、88%-106%和120%-130%,RSD在2.9%-14.1%之间;5种化合物的前处理回收率为78.5%-112%,基质效应为67%-83%。定量限为0.2μg/L-2μg/L。可见,该方法准确可靠,可同时处理大量样本,简便省时,适用于大批量尿液样品的检测。2.河南、安徽两省人群脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物标志物的内暴露研究。河南的301份尿液样品和安徽的295份尿液样品中,DON、DOM-1、DON-3-G、3-A-DON和15-A-DON含量的检测结果表明:DON和DOM-1检出水平最高,其次是DON-3-G,而3-A-DON和15-A-DON无检出。两省596份尿液样品中,共有595份样品检出Total DON,河南样品检出率为100%,安徽样品检出率为99.6%。455份样品检出Free DON,安徽、河南两省检出率分别为95.6%和90.7%。299份样品检出Total DOM,检出率为50.2%,安徽、河南样品检出率分别为68.5%和32.2%。53份样品检出Free DOM-1,检出率为8.9%,安徽、河南样品检出率分别为14.2%和3.7%。67份样品检出有Total DON-3-G,检出率为11.2%,安徽、河南检出率分别为22.4%和0.3%。安徽省样品检出率均高于河南省。安徽、河南两省人群的Total DON暴露平均水平分别为117.0μg/L和52.8μg/L;Free DON暴露平均水平分别为23.5μg/L和9.6μg/L;Total DOM-1暴露水平平均值分别为2.4μg/L和0.6μg/L;其它生物标志物的暴露水平平均值均低于各自检出限。人群内暴露水平差异与年龄存在显著性关联(P<0.05),与地域也存在显著性关联(P<0.05),与性别没有显著性关联(P>0.05)。Free DON与Total DON的暴露水平存在相关性(P<0.05),河南、安徽两省的Free DON与Total DON的比例关系分别为21.3%和20.6%。Total DOM-1与Total DON的暴露水平没有相关性(P>0.05)。两省人群中每日PDI暴露量范围为0.008-37.0μg/kg bw/d,最大值为37.4μg/kg bw/d,为安徽省的人群样本;超过PMTDI的有403个,超标率约为67.6%。安徽省PDI平均值和中位数分别为4.2μg/kg bw/d和2.6μg/kg bw/d,河南省PDI的平均值和中位数分别为1.8μg/kg bw/d和1.1μg/kg bw/d,均超过了PMTDI。从整体上来看,两省人群的DON暴露风险较为严重,未成年人群是高风险人群。综上所述,本研究建立了尿液样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物标志物的分析方法,并以河南、安徽两省尿液样品为研究对象,评估了我国人群对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的体内暴露风险,完善了我国人群对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的暴露评估。