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类受体蛋白激酶FER9(At4g39110)属于CrRLK1-L亚家族,是一种跨膜蛋白,结构上主要分为四个部分:N端信号肽、胞外结构域、跨膜域和胞内丝/苏氨酸激酶域。CrRLK1-L的首个成员是在长春花(Catharanthusroseus)中被鉴定出来的。在拟南芥中,CrRLK1-L共有17个成员,近几年该亚家族个别成员(FERONIA、THE1、HERK1、ANX1、ANX2)在细胞的伸长、植物双受精以及植物激素应答等方面的功能陆续被发现。基因芯片分析发现FER9在花粉中有特异性表达,这表明其可能在植物雄配子体的发育中发挥着重要作用。本文以FER9-DNA插入突变体为材料,利用分子生物学、细胞学等技术方法来探讨该基因的功能,主要结果如下:1、利用PCR鉴定技术,对两个FER9T-DNA插入突变体Salk033062、Salk061000(分别命名为fer9-1、fer9-2)的纯合/杂合性、插入位点进行鉴定。两个突变株均只鉴定到了杂合突变体,且杂合突变体自交子代中均无法获得纯合突变体,暗示突变纯合致死,或突变致配子(体)发育缺陷。2、对+/fer9自交子代进行遗传统计分析,发现WT和杂合突变体的分离比接近1:1,这排除了纯合致死的可能性,暗示是雌配子或雄配子的发育发生了异常。通过+/fer9与WT的正反交试验发现,+/fer9突变型花粉无法正常传递给子代,这表明+/fer9得不到纯合突变体很可能是由于突变型雄配子的发育出现了异常。3、对+/fer9雄配子体的发育进行了观察。核荧光染色观察发现+/fer9成熟花粉的营养核、精核形态正常,同野生型成熟花粉相比,形态结构上无显著差异。通过苯胺蓝染色方法,初步观察到可见的+/fer9花粉基本上能在柱头上正常萌发,且花粉管生长速率与WT无显著差异。4、通过+/fer9与qrt1杂交,在qrt1背景下观察到+/fer9的小孢子四分体可以正常发育,成熟后四个聚合在一起的花粉粒形态大小正常,营养核、精核发育未见异常。暗示其突变型雄配子体能发育成熟,形成三核花粉粒。5、对FER9的组织表达模式进行分析。获得FER9pro::GUS转基因植物,GUS组织染色显示FER9主要在花粉中有特异性表达,于植物根、茎、叶等部位表达不明显。FER9的半定量分析呈现了与GUS组织染色一致的结果。此外,获得了FER9pro::FER7-GFP转基因植株,在其成熟花粉粒上检测到通体的荧光,这从另一方面提供了FER9在成熟花粉粒中有较强表达的证据。6、对FER9的亚细胞定位进行分析,构建35S::FER9-GFP融合表达载体,于拟南芥原生质体中进行瞬时表达发现FER9定位在细胞膜上。