响应低温的BoFBX156基因克隆及其在甘蓝花蕾中的表达分析

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结球甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L),简称为甘蓝,是属于十字花科芸薹属的植物。原产地为地中海沿岸地区,因为其具有较强环境适应能力、营养价值丰富及易贮耐运等特点而得以在世界各地普遍种植。结球甘蓝是欧美等国的主要蔬菜,同时也是我国的主要叶菜类蔬菜之一。在冬季进行露地栽培结球甘蓝,极易受到低温的影响,严重将会造成减产甚至是绝收。F-box家族基因参与编码的蛋白可调节植物生命活动,已经被证明在调节植物器官发育和应对胁迫反应中起到重要作用。而在目前,关于F-box家族基因在结球甘蓝中的研究报道却未见报道。本研究以结球甘蓝“BoJF-16-1”为材料,通过RT-PCR技术克隆出结球甘蓝BoFBX156基因编码区序列,并通过对该基因理化性质分析、氨基酸序列分析和系统进化树构建等,为深入研究F-box基因在结球甘蓝中的生物学功能提供理论基础。主要研究结果如下:(1)本试验以结球甘蓝品种“BoJF-16-1”的花蕾作为实验材料,依据已知的基因序列信息,通过软件设计出该基因的特异性引物,利用RT-PCR技术对结球甘蓝BoFBX156基因编码区序列进行克隆。在结球甘蓝中克隆获得的BoFBX156基因序列全长为1035bp,编码了344个氨基酸,Gen Bank登录号为XM_013846145.2。(2)BoFBX156基因通过亚细胞定位于细胞质中,是一个具有F-box蛋白家族保守结构域的稳定性亲水蛋白。通过氨基酸序列同源比对分析发现,结球甘蓝BoFBX156基因编码的蛋白与甘蓝型油菜F-box蛋白At1g70590-like亲缘关系最近,同源性达到99.71%。二级结构分析发现α螺旋占比50.87%,无规则卷曲占比35.75%。(3)实时荧光定量PCR结果表明:在4℃和2℃处理时,F-box基因BoFBX156在结球甘蓝“BoJF-16-1”品种中的表达量最高,在品种“BoZG-16-1”中次之,在品种“BoCF-16-1”中最低;在0℃处理时,F-box基因BoFBX156在结球甘蓝“BoZG-16-1”品种中的表达量最高,在品种“BoJF-16-1”中次之,在品种“BoCF-16-1”中表达量最低。随着低温胁迫时间延长,处理时间12h时,在“BoZG-16-1”中的基因表达量高于“BoJF-16-1”、“BoCF-16-1”。BoFBX156基因在不同品种的花蕾发育中均存在表达,且随着花蕾发育基因表达量呈上升趋势。结球甘蓝BoFBX156基因在花蕾发育双核花粉期最高,在花蕾发育单核花粉期次之,在花蕾发育四分体时期最低。
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