耐力训练对AMPK_2基因敲除小鼠骨骼肌GLUT4表达的影响

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在运动中,骨骼肌的糖代谢会对运动应激产生一系列生物学上的适应,包括运动应激可以导致相关糖代谢蛋白和基因表达增加。5’-磷酸腺苷激活蛋白激酶α2亚基(AMP-activated protein kinase a 2, AMPK a 2)在运动应激介导的糖代谢中起着重要的作用。研究发现,AMPKα2与葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4, GLUT4)信号转导通路的调节在骨骼肌葡萄糖吸收能力可能起着很重要的作用。实验目的:本实验利用AMPK a 2基因敲除小鼠为研究对象,探讨运动诱导的AMPK a 2亚基在调控GLUT4蛋白和基因表达中的作用,为后续的研究工作提供理论依据。实验方法:本实验以30只C57小鼠为实验为实验对象,其中野生型小鼠18只,分别为野生安静对照组和野生耐力训练组,用C组和S组表示,C组9只,S组9只;基因敲除小鼠12只,分别为敲除安静对照组和敲除耐力训练组,表示为CK组和SK组,其中CK组为6只,SK组为6只。耐力运动设计为跑台实验,跑台水平放置,速度为12m/min;运动时间为四周,每周休息一天。最后一次运动后24小时安静状态下取材。采用荧光Real-time PCR法和Western Blotting法测定AMPK a 2以及GLUT4的mRNA和蛋白相对含量;放免法测定血胰岛素;标准比色法测定肌糖原;葡萄糖氧化酶法测定血糖值。实验结果:1.安静对照组中,基因敲除组小鼠的胰岛素水平、血糖值,GLUT4蛋白以及基因表达和野生组相比,没有出现显著性差异;耐力训练导致野生型小鼠肌糖原显著升高;野生型安静对照组小鼠肌糖原水平明显高于AMPK a 2敲除小鼠,耐力训练没有导致基因敲除小鼠肌糖原的显著升高。2.耐力训练导致AMPK a 2, GLUT4的蛋白表达和基因表达显著增加,长期耐力运动激活AMPK a 2与GLUT4,可以使小鼠肌肉产生代谢适应。3.相比野生型训练组,AMPK a 2基因敲除并没有影响耐力训练导致的小鼠肌肉中GLUT4蛋白和基因表达的显著升高。
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