【摘 要】
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为探索Nor-1在神经元中的功能及作用机制,我们首先必须明确其在神经元损伤过程中蛋白表达的情况,因此作为工具抗NOR-1抗体的制备是必须的.为此,我们运用原核基因融合表达系统
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为探索Nor-1在神经元中的功能及作用机制,我们首先必须明确其在神经元损伤过程中蛋白表达的情况,因此作为工具抗NOR-1抗体的制备是必须的.为此,我们运用原核基因融合表达系统表达Nor-1的部分蛋白,以此作为抗原制备抗NOR-1多克隆抗体;使用这种抗体检测Nor-1在小脑颗粒神经元低钾诱导的凋亡模型及缺氧模型中蛋白的表达情况,并在模型中给予forskolin、MK801和海洋甾体YC-1这些神经元保护药物,观察Nor-1的表达与神经保护及与神经元存活的关系.我们发现,这些药物在神经元损伤模型中促神经元存活的同时,诱导Nor-1蛋白的表达上调,提示Nor-1可能参与这些药物促神经元存活作用的信号转递.这些药物的神经元保护作用机制的研究已经较为深入,而我们的实验为这些药物的神经保护机制的研究提供了新的线索和思路.抗NOR-1多克隆抗体的获得为Nor-1的生物学功能研究奠定了良好的基础.作为新的促神经元存活的基因,明确Nor-1在小脑颗粒神经元损伤模型中蛋白表达的情况为探索新的神经元保护信号转导通路打下基础.第一章大鼠Nor-1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备选取Nor-1中能表达较好特异性及免疫原性蛋白的一段基因,构建其原核表达系统,在大肠杆菌中高效表达GST-NOR-1融合蛋白并以此制备抗NOR-1的特异性抗体.第二章Nor-1在小脑颗粒神经元损伤模型中表达的研究利用制备的抗NOR-1多克隆抗体探讨Nor-1在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡模型及小脑颗粒神经元缺氧模型中的表达情况,分别加入forskolin,NMDA受体抑制剂MK801,及海洋甾体化合物YC-1等药物处理,观察药物对模型中Nor-1表达的影响.
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