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纤维素是自然界中含量十分丰富的有机物，其完全降解过程需要几种酶的共同参与、协调配合。纤维素酶具有催化效率高、安全性好等优点，在纺织、洗涤、动物饲料添加剂等方面应用广泛。 本实验室选育的纤维素酶产生菌草酸青霉（Penicilliumoxalicum）X10-279，遗传性状稳定，滤纸酶活为16.70IU/mL。在纤维素酶的共同参与下，纤维素降解生成葡萄糖，纤维二糖水解酶(CBHⅠ)是纤维素酶系中唯一可以作用于结晶纤维素的组分，在纤维素降解过程中起重要作用。本研究克隆并在大肠杆菌中表达草酸青霉X10-279纤维二糖水解酶基因cbhⅠ，希望能够获得高纤维素活性的重组菌，从而提高纤维素的降解效率。 根据GenBank中已发表的青霉属来源的纤维二糖水解酶基因cbhⅠ，分别设计含有EcoRⅠ和NotⅠ限制性酶切位点的正向引物和反向引物。以草酸青霉X10-279基因组DNA为模板，进行PCR，将回收得到的PCR产物与克隆载体pMD18-T连接，转化至大肠杆菌（Escherichiacoli）Top10感受态细胞中，将重组菌进行测序，重组质粒命名为pMD18-T-cbhⅠ。生物信息学分析表明：克隆得到的X10-279纤维二糖水解酶基因cbhⅠ(GenBank，获得基因登录号KR269867，蛋白登录号AKI32221)全长1632bp，无内含子，编码543个氨基酸和一个终止密码子。与斜卧青霉（Penicilliumdecumbens）CBHⅠ（GenBank登陆号ACV95805）的同源性最高，氨基酸序列同源性达98.70％。蛋白理论分子量为56.66kD，理论等电点为4.79，属于糖基化水解酶第7家族。 重组质粒pMD18-T-cbhⅠ双酶切获得的cbhⅠ与表达载体pET-28a(+)连接，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，成功构建了重组菌pET-28a(+)-cbhⅠ/BL21。目的蛋白在宿主中实现了大量表达，但主要以包涵体的形式存在。对诱导条件进行优化，确定最佳诱导条件为：当OD600达到0.3~0.4时，加入IPTG至终浓度为0.8mmol/L，在37℃诱导5h，目的蛋白的表达量达到15.14mg/L，比优化前提高了50.49%。 利用Ni柱对包涵体进行纯化，纯化后蛋白的表达量为3.29μg/mL，收率为21.35%。对目的蛋白进行复性，复性后蛋白的pNPC酶活为10.3U/L，比活力为94.3U/mg，最适pH为5.0，最适温度为55℃，且具有较好的温度适应性。