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目的:本课题以垂体瘤细胞在缺氧环境中HIF-1α对雌激素/ERα信号通路的影响为探讨目的,试图为垂体瘤发生、发展提出新的发生机制。本项目的完成将为垂体瘤发生、发展提供新的理论依据,为垂体瘤发生、发展的转化机制预提供新的潜在标靶。方法:人垂体瘤组织都有HIF-1α的表达,提示组织缺氧是人垂体瘤组织基本特征,因此本课题细胞实验在缺氧培养箱模拟缺氧状态下进行。由于目前没有成熟人垂体瘤细胞系,本实验中我们应用大鼠垂体瘤MMQ细胞,检测在缺氧环境下雌激素对MMQ细胞ERα信号途径的影响,探讨HIF-1α抑制剂2ME垂体瘤细胞雌激素作用的影响。具体方法如下:1.在氧浓度为1%缺氧培养箱中,先在96孔板中平铺MMQ细胞,再将10~3个MMQ细胞转入96孔板,1组为10孔,分3组,分别加入E2(10nM)、2ME(5nM)、E2/2ME培养24h。2ME用乙醇溶解。用CCK-8法检测细胞增殖性。2.用10~6个MMQ细胞转入6孔板,2孔为1组,分3组,分别加入E2(10nM)、2ME(5nM)、E2/2ME培养24h。2ME用乙醇溶解。用流式细胞仪检测细胞凋亡。3.把MMQ细胞转入6孔板,6孔为1组,分3个板,分别加入E2(10nM)、2ME(5nM)、E2/2ME培养24h。2ME用乙醇溶解。用Western Blot检测ERα、VEGF、BNIP3、PCNA等相关分子的蛋白表达水平。结果:1.E2低浓度刺激垂体瘤细胞的生长,E2能够微弱上调ERα受体的表达;2.E2促进VEGF,PCNA的表达,但是加入2ME抑制HIF-1α后能部分逆转E2的上述作用。3.通过E2/2ME抑制HIF-1α相对于单纯E2或2ME能够上调BNIP3凋亡相关蛋白的表达;4.E2能够部分逆转缺氧环境对HIF-1α的上调作用,2ME能抑制HIF-1α的表达。结论:低浓度雌激素能够促进MMQ细胞增殖。E2能部分下调缺氧环境中HIF-1α的表达,2ME能抑制HIF-1α表达,从而部分逆转E2对MMQ细胞的增殖作用。缺氧环境中雌激素和HIF-1α存在交互作用,具体还需要进一步研究。