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目的:建立经绿色荧光蛋白基因转染的骨肉瘤细胞亚株并研究其生物特性,探讨骨肉瘤转移过程中基因的参与,以筛选骨肉瘤新的肿瘤相关及转移相关候选基因。通过比较MTA1基因在人骨肉瘤细胞高低转移株的表达水平,探讨MTA1表达与骨肉瘤细胞浸润和转移潜能的相关性。方法:利用脂质体转染pEGFP基因入人骨肉瘤MG63细胞系,通过细胞电泳,获得高低转移株细胞克隆M6和M8,经体外细胞增殖、软琼脂形成、生长曲线、检测细胞周期、裸鼠成瘤试验综合分析其生物学行为改变。采用含有8064个基因探针的cDNA基因芯片,以M6和M8作为研究对象,M6为实验组,M8为对照组,用半定量RT—PCR验证cDNA表达微阵列检测的结果,研究两细胞株基因表达的差异。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MG-63细胞高低转移株MTA1的表达情况,同时,用Boyden小室体外侵袭实验检测高低转移株的体外侵袭力的变化。结果:发现M6和M8两株均保持人类染色体核型,所形成肿瘤显示人成骨肉瘤上皮样组织形态,其中M6的群体倍增时间为38.4h,软琼脂形成率为18.7%,M8群体倍增时间为23.0h,软琼脂形成率为29.3%。裸小鼠背部皮下接种M6和M8,发现M8成瘤时间短,细胞增殖快,但在4周内两者均不发生转移。2个骨肉瘤细胞株差异表达的基因共有发生显著性表达变化的基因330个,其中与对照组(M8)相比,在实验组(M6)中上调表达的基因有152个,下调表达的基因有178个。在按照不同基因功能分类对实验结果进行分析时发现,具有比较明显的功能类别特征的表达变化基因主要包括与细胞增殖生长相关的基因,其表达变化的模式提示M6亚株中细胞增殖生长受到抑制;其次是大量与表达调控及信号传递相关的基因的表达变化,提示在两亚株间存在明显的基因表达模式的差异。这些基因大多是膜蛋白、细胞骨架蛋白,或和细胞信号转导有关,基因功能复习提示和肿瘤转移有可能的关联性。RT-PCR结果显示MTA1在MG-63低转移细胞株中表达水平低(1.32),在高转移细胞株中表达水平高(6.27)(p<0.05);Boyden小室体外侵袭实验显示MG-63高转移株细胞体外侵袭力强,其穿膜细胞相对百分率为46.3±2.4%,低转移株细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞相对百分率(12.6±1.1)%,两者差异有显著性意义(P<0.05);转染MTA1基因后,低转移细胞株转移潜能较未转染细胞明显增高。结论:骨肉瘤细胞亚系有不同的转移特性,GFP的整合及表达未对MG63细胞的生长状态造成明显影响,可作为报告基因进一步了解骨肉瘤细胞转移的差异性分析。基因芯片方法对于筛选骨肉瘤转移相关基因有独特的优势,获得的差异表达基因具有较强的代表性,对MG63细胞株的基因表达谱的进一步分析,为寻找骨肉瘤相关基因提供了重要线索。MTA1与人骨肉瘤细胞转移潜能有密切关系,MTA1对肿瘤转移的作用机制以及作为干预肿瘤转移靶基因的可能性值得进一步探讨。