稳定表达EGFP的不同转移特性骨肉瘤细胞亚株的筛选及基因差异性分析

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ysq2009123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:建立经绿色荧光蛋白基因转染的骨肉瘤细胞亚株并研究其生物特性,探讨骨肉瘤转移过程中基因的参与,以筛选骨肉瘤新的肿瘤相关及转移相关候选基因。通过比较MTA1基因在人骨肉瘤细胞高低转移株的表达水平,探讨MTA1表达与骨肉瘤细胞浸润和转移潜能的相关性。方法:利用脂质体转染pEGFP基因入人骨肉瘤MG63细胞系,通过细胞电泳,获得高低转移株细胞克隆M6和M8,经体外细胞增殖、软琼脂形成、生长曲线、检测细胞周期、裸鼠成瘤试验综合分析其生物学行为改变。采用含有8064个基因探针的cDNA基因芯片,以M6和M8作为研究对象,M6为实验组,M8为对照组,用半定量RT—PCR验证cDNA表达微阵列检测的结果,研究两细胞株基因表达的差异。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MG-63细胞高低转移株MTA1的表达情况,同时,用Boyden小室体外侵袭实验检测高低转移株的体外侵袭力的变化。结果:发现M6和M8两株均保持人类染色体核型,所形成肿瘤显示人成骨肉瘤上皮样组织形态,其中M6的群体倍增时间为38.4h,软琼脂形成率为18.7%,M8群体倍增时间为23.0h,软琼脂形成率为29.3%。裸小鼠背部皮下接种M6和M8,发现M8成瘤时间短,细胞增殖快,但在4周内两者均不发生转移。2个骨肉瘤细胞株差异表达的基因共有发生显著性表达变化的基因330个,其中与对照组(M8)相比,在实验组(M6)中上调表达的基因有152个,下调表达的基因有178个。在按照不同基因功能分类对实验结果进行分析时发现,具有比较明显的功能类别特征的表达变化基因主要包括与细胞增殖生长相关的基因,其表达变化的模式提示M6亚株中细胞增殖生长受到抑制;其次是大量与表达调控及信号传递相关的基因的表达变化,提示在两亚株间存在明显的基因表达模式的差异。这些基因大多是膜蛋白、细胞骨架蛋白,或和细胞信号转导有关,基因功能复习提示和肿瘤转移有可能的关联性。RT-PCR结果显示MTA1在MG-63低转移细胞株中表达水平低(1.32),在高转移细胞株中表达水平高(6.27)(p<0.05);Boyden小室体外侵袭实验显示MG-63高转移株细胞体外侵袭力强,其穿膜细胞相对百分率为46.3±2.4%,低转移株细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞相对百分率(12.6±1.1)%,两者差异有显著性意义(P<0.05);转染MTA1基因后,低转移细胞株转移潜能较未转染细胞明显增高。结论:骨肉瘤细胞亚系有不同的转移特性,GFP的整合及表达未对MG63细胞的生长状态造成明显影响,可作为报告基因进一步了解骨肉瘤细胞转移的差异性分析。基因芯片方法对于筛选骨肉瘤转移相关基因有独特的优势,获得的差异表达基因具有较强的代表性,对MG63细胞株的基因表达谱的进一步分析,为寻找骨肉瘤相关基因提供了重要线索。MTA1与人骨肉瘤细胞转移潜能有密切关系,MTA1对肿瘤转移的作用机制以及作为干预肿瘤转移靶基因的可能性值得进一步探讨。
其他文献
为了解大学生吸烟状况及其危害程度,对具有吸烟行为的男生进行了问卷调查、分析,以期预防干预大学生的吸烟行为,倡导大学生戒烟、禁烟,树立正确的健康行为方式,促进其健康成
颞顶额区皮瓣、筋膜瓣可以用于眉、跟睑、耳、鼻再造,上下唇和颞颌关节的修复。筋膜瓣还可以做游离组织移植修复手及下肢缺损。头皮的层次解剖和血管解剖研究国内外学者均有较
目的:研究异丙酚靶控输注(TCI)镇静时脑电(EEG)非线性参数关联维数(D2)、近似熵(ApEn)、复杂度(Cx)和双频指数(BIS)的变化,并将四个EEG指数在意识消失时的预测概率(Pk)进行比较,即各脑电指
近年来,随着微纳卫星编队飞行成为诸如引力波探测等领域的研究热点,推力量级更小的新兴电推进器,例如胶体推进器(Colloid Thruster,CT)的应用前景越来越广泛,尤其是对其电源
马克思主义经典作家的组织纪律性理论要求我们党“守纪律、讲规矩”;习近平“讲规矩”思想,是对世界某些社会主义国家共产党丧失政权教训的深刻总结;是习近平从政以来一以贯
香港茶文化掠影福建农业大学林更生一、茶叶与香港历史香港并没有出产什么名茶,论饮茶之道也远不及闽粤讲究,然而,如果深一步研究香港的茶文化,就会发觉香港的历史与茶叶关系密切
期刊
为了解决低渗透油田污水处理后回注水不达标的问题,根据低渗透油田采出水的水质特性,设计了一套一体化橇装微滤膜污水处理装置。依托该微滤膜污水处理装置,在延长油田某处理
本研究发现用ConA活化的灭活自身T细胞皮下免疫C57BL/6J小鼠后,能够明显抑制小鼠淋巴瘤细胞株(EL-4)在体内生长,小鼠生存时间延长。对其作用机制研究发现,Th1型细胞因子分泌
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
以华龙一号、高温气冷堆为代表的先进核电示范工程大多属于设计、施工、修改并行工程,引入BIM技术,将核电规则融入其中,从而将BIM技术应用于钢筋深化设计并详细阐述BIM模式的