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牛羊等动物冷冻精液的人工授精技术现在已经越来越广泛地应用在了生产实践中,但猪的精液冷冻技术一直没有得到很完整的技术路线,所以难以推广应用。本研究对稀释液中的Equex浓度、不同解冻液、不同冷冻方法和个体差异等猪精液冷冻过程中出现的问题进行探索,通过对比冷冻-解冻后精子的活力和顶体完整率,以及综合体外受精实验的结果,找到最佳的冷冻液配方、解冻液和冷冻方法。一、猪精液冷冻方法研究1、冷冻稀释液中Equex添加浓度对精液冷冻效果的影响采用干冰颗粒冷冻法对猪的精液进行冷冻保存,对比不同浓度Equex(0、0.4%、0.5%、0.6%)对冷冻效果的影响。结果表明：不添加Equex处理组的精子活力(0.14)和顶体完整率(40.03%)均显著低于添加Equex的处理组。在三个添加了Equex的处理组中,从精子活力来看,0.5%Equex处理组(0.24)显著高于其它两组(0.21和0.20)(P<0.05)；从顶体完整率来看,虽然0.6%Equex组(58.39%)略高于0.5%Equex组(57.92%),但二者无显著差异,二者均显著高于0.4%组(51.70%)。说明0.5%为Equex较为合适的添加浓度。2、不同解冻液对冷冻精液解冻效果的影响选取三批用含有0.5%Equex的冷冻液冷冻的精液,分别用Glucose-EDTA和DPBS-BSA进行解冻,结果表明：用Glucose-EDTA解冻液解冻后的活力(0.22)要显著高于DPBS-BSA解冻后的活力(0.13)(P<0.05)。3、不同冷冻方法对猪精液冷冻效果的影响对比干冰颗粒、液氮颗粒和液氮细管三种冷冻方法冷冻精液的效果,结果显示：干冰颗粒冷冻法冷冻的猪精液解冻后精子活力(0.23)略高于液氮颗粒法的精子活力(0.20),而二者均显著高于细管冻精法的精子活力(0.08)(P<0.05)；干冰颗粒冷冻法的顶体完整率(58.0%)要显著高于液氮颗粒法(54.7%)和细管冷冻法的顶体完整率(54.2%)(P<0.05),但液氮颗粒法和细管冷冻法的顶体完整率无显著差异。结果表明,干冰颗粒冷冻法是最好的冷冻方法。4、种公猪个体差异对精液冷冻效果的影响选择三头有稳定的自然交配和人工授精成功率记录的种公猪,比较个体差异对精子冷冻-解冻后活力和顶体完整率的影响。结果表明：三个个体的精液冷冻解冻后精子顶体完整率无差异,但精子活力三个个体间彼此差别显著。二、猪冷冻精液的体外受精1、猪冷冻精液的体外受精效果以孤雌激活和鲜精受精为对照,进行冷冻-解冻精液的体外受精实验。经干冰颗粒法冷冻、Glucose-EDTA解冻液解冻的精液,体外受精后的囊胚发育率(17.6%)与鲜精体外受精囊胚率(17.9%)无显著差异,但二者均显著低于孤雌激活对照组的囊胚率(36.6%)(P<0.05)。2、个体差异对鲜精和冷冻精液体外受精效果的影响选取三头有稳定人工授精成功率的优良种公猪,均进行新鲜精液和冷冻-解冻精液的体外受精。结果表明：在鲜精的体外受精实验中,0101号的囊胚率(17.9%)显著高于1001号(9.0%),二者均显著高于2101号(0)(P<0.05)；在冷冻-解冻精液的体外受精实验中,0101号的囊胚率(17.6%)显著高于1001号(4.0%),二者均显著2101号(1.1%)(P<0.05)。个体差异会导致体外受精实验结果的不同。三、冷冻精液的人工授精选取干冰颗粒冷冻法冷冻猪精液,用Glucose-EDTA解冻液解冻,对三头青年母猪进行人工授精。后期观察到一头返情,屠宰后子宫内无胎儿；两头没有观察到返情,但预产期过后没有生产,屠宰后子宫内未见胎儿综合上述研究结果可见,干冰颗粒法冷冻结合0.5%Equex解冻液和高糖-EDTA解冻液解冻是较为理想猪精液冷冻保存方法,经该方法冷冻、解冻的猪精液,体外受精后的胚胎发育率与鲜精没有显著差异。猪冷冻精液的人工授精实验尚需要进一步深入和完善。