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本研究对1例遗传性蛋白C缺陷症和1例异常内含子22倒位所导致的血友病A分别进行了临床诊断、家系调查、表型检测、基因分析,并对新发现的蛋白C Gly74Ser突变进行了蛋白体外表达和酶动力学研究,探讨它们的分子发病机制。蛋白C(protein C)是一种Vit K依赖的丝氨酸蛋白酶,能被凝血酶(Thrombin,Th)-血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)复合物激活为活化的蛋白C(activated protein C,APC),在辅因子蛋白S(protein S)的辅助下灭活活化的凝血因子V(FVa)和活化的凝血因子VIII(FVIIIa)。我们发现一例静脉血栓家系,先证者血浆PC抗原正常,但凝固法测定抗凝活性仅为正常血浆的34%;基因分析显示先证者均携带一个新的PROC基因突变(c.346G>A,p.Gly74Ser);采用先证者血浆进行凝血酶生成试验,结果显示APC抗凝活性明显减低。酶动力学研究结果显示,PC-G74S突变体蛋白可以被Th-TM复合物正常激活;在不含PS的实验条件下,APC-G74S表现出正常的抗凝活性和酶催化位点活性。但在含PS的实验条件下,APC-G74S的抗凝功能明显受损;采用FVa-Leiden作为底物也获得了相同结果,证实G74S突变影响了APC对FVa-Arg306位点的裂解。这些结果提示G74位点是APC与PS结合的关键位点。血友病A(Haemophilia A,HA)是常见的X连锁隐性遗传的出血性疾病,大约一半的重型HA患者由F8基因内含子22倒位引起(intron 22 inversion,Inv22)。Inv22由F8基因内含子22内的1个同源序列(intron 22 homolog,int22h)与F8基因外的2个int22h间发生非等位基因同源重组(nonallelic homologous recombination,NAHR)产生,基本类型包括int22h相关的倒位(分为I型和II型)、int22h介导的缺失和int22h介导的大片段重复。异常Inv22模式指除了4种基本类型以外的由int22h介导的基因重组。大多数Inv22来源于父系精原细胞减数分裂,目前仅报道一例女性嵌合携带者。通过长距离PCR预扩增结合AccuCopy定量技术(AccuCopy quantification combined with pre-amplification of long-distance PCR,AQ-PLP),我们诊断出1例携带异常Inv22模式的家系,并采用基因组步移技术、基因芯片和实时荧光定量PCR检测先证者基因断裂点,阐明分子发病机制。先证者携带新的异常Inv22模式,可概括为一段位于int22h-2到TMLHE基因1号内含子之间的113.3kb大片段重复替代了F8基因内含子23号到int22h-1之间18.1kb大小的片段。基因重组发生在先证者母亲的胚胎发育早期,母亲表现为体细胞和生殖细胞嵌合。重组机制可能为微小同源介导的断裂诱导的复制(microhomology-mediated break-induced replication,MMBIR)和断裂诱导的复制(break-induced replication,BIR)。