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D-氨基葡萄糖酸(2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖酸),是根瘤菌脂多糖的一种成分,是合成多种手性称氨基酸的原料。D-氨基葡萄糖酸(D-GlcNA)作为一种阳离子配位剂被广泛研究,其与铂的络合物能用于治疗癌症。D-氨基葡萄糖酸与三价铬形成的铬配位化合物作为人体生物活性元素铬的补充,可以改善糖尿病症状,特别在快速降低血糖方面有显著效果。D-氨基葡萄酸自身特有的生物活性,还使得该药物兼有降脂、减肥等功效。该化合物在带电生物分子色谱中也有潜在应用。
微生物法发酵氧化D-氨基葡萄糖制备D-氨基葡萄糖酸能够克服化学法不易定位、氧化程度不易控制等弱点。本研究以高浓度D-氨基葡萄糖盐酸盐(D-glucosaminate.hydrochloric)为碳源筛选到一株能氧化D-氨基葡萄糖生成D-氨基葡萄糖酸(D-glucosaminic acid)的高产菌株M123,即使在氧化发酵的后期菌株对产物的利用也极其微弱,具备了生物转化高产菌的优良特征。经Biolog鉴定系统与16S rDNA测序分析鉴定为Pseudomonas putida。经单因子和正交试验对培养基优化后,得出较佳发酵培养基组成为:D-氨基葡萄糖盐酸盐3%,葡萄糖0.5%,磷酸二氢钾0.1%,七水合硫酸镁0.05%,碳酸钙1%,尿素0.3%,酵母粉0.2%;较佳的培养条件为30℃、培养基初始pH6.0、180r m-1进行发酵。从30g/L氨基葡萄糖盐酸盐出发,发酵48h可制备得27 g/L D-GlcNA,D-氨基葡萄糖盐酸盐摩尔转化率近100%;从60 g/L氨基葡萄糖盐酸盐出发,发酵72h可制备得51.49 g/L D-GlcNA,D-氨基葡萄糖盐酸盐摩尔转化率95.35%。产物经过分离纯化,采用核磁共振波谱法验证与标准品一致,确定其为D-氨基葡萄糖酸。
本研究从自然界筛选到了具有自主知识产权的D-氨基葡萄糖酸生产菌,打通了微生物法氧化发酵制备D-氨基葡萄糖酸的工艺路线,为进一步发展相关氧化代谢酶系的研究及D-氨基葡萄糖酸的产业化研究奠定了基础。