背景:骨组织工程是促进骨再生的一种很有潜力的治疗策略。骨髓间基质干细胞（BMSCs）和内皮祖细胞（EPCs）是组织工程中促进成骨和成血管常用的细胞。以往的研究表明,高糖环境可影响BMSCs细胞功能,而EPCs可调节BMSCs的增殖和分化。然而,其潜在机制尚不清楚。旁分泌是细胞之间相互作用的机制之一,血管内皮生长因子（VEGF）可由多种细胞分泌,其在骨修复的所有阶段都起着至关重要的作用,包括炎症、膜内和软骨内骨化,是骨修复和再生中诱导血管生成和血管化的最有用的生长因子之一。目的:本实验研究目的旨在研究BMSCs与EPCs共培养体系中VEGF的表达变化,以及其对高糖环境下BMSCs增殖、分化、迁移的影响,并对相关机制进行探索。方法:1.采用密度梯度离心法配合差速贴壁法分离大鼠原代BMSCs和EPCs。对所得细胞进行鉴定采用诱导分化实验或小管形成实验,并结合细胞形态学和细胞表面标志物检测;2.配制含不同浓度VEGF的高糖培养基,分别作用于BMSCs,采用CCK8法检测细胞增殖活性,并选取合适浓度;将VEGF作用于BMSCs,使用ALP染色及RT-PCR检测其对BMSCs成骨分化的影响,;采用划痕和Transwell迁移实验检测其对BMSCs迁移能力的影响。3.将VEGF作用于BMSCs,使用RT-PCR检测VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3的mRNA的变化;采用免疫荧光检测细胞骨架蛋白F-actin的变化以及YAP蛋白的核移位情况,并用免疫印迹检测YAP蛋白总含量的变化。结果:1.使用密度梯度离心配合差速贴壁法成功分离出大鼠原代BMSCs及EPCs。实验结果表明BMSCs具有成脂、成骨、成软骨向分化潜能,且细胞表面标志物检测结果显示CD90+、CD44+,CD31-、CD45-;小管形成实验表明EPCs具备成血管功能,细胞表面标志物检测显示CD31+、CD144+、VEGFR2+。2.CCK8结果显示,在高糖环境下,当VEGF浓度高于2.5ng/m L时,能显著增强BMSCs增殖活性,因此本实验后续选用浓度为2.5ng/m L。经成骨诱导7天后,加入VEGF组的细胞ALP染色较深,RT-PCR检测显示OCN、Runx2及Osterix基因表达均上调。加入VEGF培养的BMSCs24h后划痕创面残留率为9.7%±0.6%,明显低于BMSCs对照组（19.3%±1.3%）,Transwell迁移实验BMSCs+VEGF组迁移细胞数较多,与划痕实验结果一致。3.VEGF作用于BMSCs后,T-PCR检测显示VEGFR2表达上调（P<0.05）,使用VEGFR2受体抑制剂后能逆转VEGF对BMSCs成骨分化能力的增强;免疫荧光染色显示,细胞骨架蛋白F-actin的形态和数量发生明显变化,且YAP蛋白的核转移量明显增加;免疫印迹实验结果显示YAP蛋白总含量也有所增加。结论:1.密度梯度离心法配合差速贴壁法可成功分离大鼠原代BMSCs与EPCs。2.VEGF可增强高糖环境下BMSCs的增殖活性、迁移及成骨分化能力。3.VEGF通过VEGFR2受体作用于细胞,其可能通过重塑细胞骨架蛋白F-actin及调节YAP蛋白的核转移量影响细胞功能。