【摘 要】
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【目的】对一株高产Neu5Ac醛缩酶的诱导型基因工程菌株E. coli DH5α/pRY1进行发酵产酶,并对酶进行固定化,对固定化酶进行生化性质的测定分析,为固定化Neu5Ac醛缩酶应用于工
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【目的】对一株高产Neu5Ac醛缩酶的诱导型基因工程菌株E. coli DH5α/pRY1进行发酵产酶,并对酶进行固定化,对固定化酶进行生化性质的测定分析,为固定化Neu5Ac醛缩酶应用于工业生产神经氨酸奠定基础。 【方法】用含TB培养基的发酵罐对该菌株进行发酵。发酵条件为:通气1.4vvm,搅拌550rpm,先37℃培养1~2小时,待A600>1.0时,降温至22℃,分两次添加乳糖至终浓度为1.5%,继续发酵18~20小时,出料,4℃,5000rpm离心收集菌体。菌体冷冻过夜后,用pH7.5磷酸缓冲液悬浮,超声波破碎,测定酶液在不同破碎条件下的酶活,确定其最佳破碎条件。破碎后悬浮液经15000rpm,4℃离心即得无细胞上清粗酶液。通过对粗酶液热变性处理,对酶进行纯化。用Eupergit? C环氧树脂对酶进行固定化,以蛋白/干载体比例、温度、时间为三因素进行三因素三水平的正交试验,确定最佳固定化条件。对制得的固定化酶,研究其酶动力学性质,测定温度和pH对固定化酶活性的影响。对固定化酶进行贮存稳定性和重复使用稳定性试验。 【结果】20L发酵液得到湿菌体723g。菌体超声波破碎的最佳条件为:功率
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