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目的：探讨FW-04-806协同Ganetespib体外抑制HER2阳性乳腺癌细胞增殖及诱导凋亡的作用机制。
方法：(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测Ganetespib单药、FW-04-806单药、两药联合以及17-AAG联合FW-04-806用药抑制HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖的作用；(2)通过ComPusyn软件计算Ganetespib联合FW-04-806以及17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞的CI值；(3)蛋白印迹法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药、两者联合用药、17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞中PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路中相关蛋白活性在量效的作用下的影响；(4)Annexin-V-FITC/PI双染法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药以及两药联合用药诱导HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞的凋亡作用；(5)免疫共沉淀法研究Ganetespib单药、FW-04-806单药、17-AAG单药对HER2蛋白、Hsp90/CDC37复合物蛋白作用的影响；(6)蛋白印迹法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药对Hsp27蛋白表达量的影响。
结果：(1)MTT结果显示联合用药比单药具有更强抑制HER2阳性乳腺癌细胞；(2)ComPusyn软件分析，17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖具有较好的协同抑制作用；(3)ComPusyn软件分析，小剂量的Ganetespib联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖具有较好的协同抑制作用；(4)免疫印迹结果显示Ganetespib和FW-04-806随剂量的增加在大剂量下能有效的阻断HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(5)17-AAG协同FW-04-806能有效的双重阻断HER2阳性乳腺癌MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(6)免疫印迹结果显示小剂量的Ganetespib协同FW-04-806能有效的双重阻断HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(7)Ganetespib联合FW-04-806比单药更明显促进HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞凋亡；(8)免疫共沉淀显示FW-04-806影响Hsp90/CDC37复合物的结合，而Ganetespib、17-AAG均不影响Hsp90/CDC37复合物；(9)免疫印迹结果显示Ganetespib随剂量的增加能增加Hsp27蛋白的量，而FW-04-806随剂量增加减少Hsp27蛋白的量。
结论：在体外实验中，小剂量Ganetespib联合FW-04-806对抑制HER2阳性乳腺癌细胞增殖具有协同作用，能有效地抑制PI3K/AKT/mTOR和Ras/Raf/MAPK信号通路活性，增强抗肿瘤疗效。两药联合作用的机制是Ganetespib和FW-04-806虽然都是作用于Hsp90的N端，但Ganetespib不会影响Hsp90/CDC37复合物，而FW-04-806却会影响Hsp90/CDC37复合物；而且Ganetespib引起Hsp27代偿性升高，而FW-04-806降低Hsp27量。因此，Ganetespib联合FW-04-806的用药方案可以为更有效治疗HER2阳性乳腺癌肿瘤提供新治疗的理论基础和思路。
方法：(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测Ganetespib单药、FW-04-806单药、两药联合以及17-AAG联合FW-04-806用药抑制HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖的作用；(2)通过ComPusyn软件计算Ganetespib联合FW-04-806以及17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞的CI值；(3)蛋白印迹法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药、两者联合用药、17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞中PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路中相关蛋白活性在量效的作用下的影响；(4)Annexin-V-FITC/PI双染法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药以及两药联合用药诱导HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞的凋亡作用；(5)免疫共沉淀法研究Ganetespib单药、FW-04-806单药、17-AAG单药对HER2蛋白、Hsp90/CDC37复合物蛋白作用的影响；(6)蛋白印迹法检测Ganetespib单药、FW-04-806单药对Hsp27蛋白表达量的影响。
结果：(1)MTT结果显示联合用药比单药具有更强抑制HER2阳性乳腺癌细胞；(2)ComPusyn软件分析，17-AAG联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖具有较好的协同抑制作用；(3)ComPusyn软件分析，小剂量的Ganetespib联合FW-04-806对HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞增殖具有较好的协同抑制作用；(4)免疫印迹结果显示Ganetespib和FW-04-806随剂量的增加在大剂量下能有效的阻断HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(5)17-AAG协同FW-04-806能有效的双重阻断HER2阳性乳腺癌MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(6)免疫印迹结果显示小剂量的Ganetespib协同FW-04-806能有效的双重阻断HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK等信号通路；(7)Ganetespib联合FW-04-806比单药更明显促进HER2阳性乳腺癌BT-474、MDA-MB-453细胞凋亡；(8)免疫共沉淀显示FW-04-806影响Hsp90/CDC37复合物的结合，而Ganetespib、17-AAG均不影响Hsp90/CDC37复合物；(9)免疫印迹结果显示Ganetespib随剂量的增加能增加Hsp27蛋白的量，而FW-04-806随剂量增加减少Hsp27蛋白的量。
结论：在体外实验中，小剂量Ganetespib联合FW-04-806对抑制HER2阳性乳腺癌细胞增殖具有协同作用，能有效地抑制PI3K/AKT/mTOR和Ras/Raf/MAPK信号通路活性，增强抗肿瘤疗效。两药联合作用的机制是Ganetespib和FW-04-806虽然都是作用于Hsp90的N端，但Ganetespib不会影响Hsp90/CDC37复合物，而FW-04-806却会影响Hsp90/CDC37复合物；而且Ganetespib引起Hsp27代偿性升高，而FW-04-806降低Hsp27量。因此，Ganetespib联合FW-04-806的用药方案可以为更有效治疗HER2阳性乳腺癌肿瘤提供新治疗的理论基础和思路。