采用小鼠模型评价糠氨酸的毒性作用

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本研究通过构建体内体外模型,综合评价糠氨酸对HePG-2,HeK-293,CaCo-2,SK-N-SH的细胞毒性以及对小鼠的毒性作用。主要研究内容和结果如下:1.糠氨酸对体外细胞的影响:利用CCK-8试剂盒检测细胞活力,检测结果显示糠氨酸处理组与对照组相比细胞活力显著下降。利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,检测结果显示糠氨酸处理组细胞在S期时细胞分裂抑制,HePG-2,HeK-293细胞凋亡率升高。2.糠氨酸半数致死浓度值(LD50):根据构建急性毒性小鼠模型试验得到糠氨酸对小鼠半数致死浓度值(LD50)为1.6g/kg。依据1/3半数致死浓度值计算慢性毒性小鼠模型中糠氨酸浓度分别为糠氨酸低剂量组(0.1g/kg)、糠氨酸中剂量组(0.25 g/kg)、糠氨酸高剂量组(0.50 g/kg)。3.糠氨酸对小鼠的毒性作用:结果1)小鼠体重变化:糠氨酸处理组小鼠体重明显降低。2)脏器系数比值:根据小鼠脏器系数比值得出,糠氨酸处理组雌雄鼠的肝脏指数与肾脏指数明显增大。3)血常规检测:根据血细胞分析仪检测结果显示糠氨酸处理组,白细胞总数(WBC)增加,血小板(PLT)和红细胞总数(RBC)减少。4)血清生化指标:利用酶联免疫发检测结果表明糠氨酸处理组,谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),肌酸酐(CR),谷氨酰转移酶(γ-GT),丙二醛(MDA),总胆红素(TBil),胰岛素,尿酸(UA)含量显著升高,而谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量显著下降。5)组织结构影响:根据组织切片观察得到,糠氨酸高剂量组(0.5g/kg)的肝组织显示出细胞变形,部分区域水肿,在高剂量组(0.5g/kg)的雌雄鼠肝脏组织中偶尔也可以观察到出血。6)肝肾组织凋亡蛋白检测:利用蛋白免疫印迹发检测结果表明,糠氨酸处理组抑制凋亡的蛋白(Bcl-XL和Bcl-2)的表达量显著降低,肝组织和肾组织中促进凋亡因子Bax和Caspase-3的表达均显著升高(P<0.05)。4.糠氨酸对小鼠肠道微生物的影响。利用16S rRNA测序技术检测小鼠肠道菌群变化。结果显示,糠氨酸处理组中放线菌和厚壁菌的数量在门水平上显著增加(P<0.05)。糠氨酸处理组中普氏菌和拟杆菌的数量在属水平上显著增加(P<0.05),而糠氨酸处理组的乳酸杆菌的数量在属水平上显著降低(P<0.05)。
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