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目的:研究滋补脾阴方药对背根神经节神经元缺氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机理。方法:1.取新生24h SD大鼠背根神经节(DRG),利用贴壁培养法培养大鼠背根神经节神经元。并用差速贴壁法及阿糖胞苷干预对细胞进行纯化。2.对培养至4天纯化好的细胞行原位免疫荧光鉴定确认为DRG神经元。对预保护24小时的细胞行免疫荧光检测,对比各组细胞的数量及观察细胞突起生长情况。3.MTT法计算细胞存活率及细胞活力,筛选药物最佳药物浓度。4.利用红外光谱对含药血清和空白血清成分进行测定,确认含药血清和空白血清成分有所不同,滋补脾阴方药确实进入到血清中。5.利用Na2S2O4建立细胞缺氧损伤模型,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养上清液中SOD含量;TAB法测定细胞培养上清中MDA含量;酶活力法测定LDH。6.统计学处理:所有试验均重复10次,应用SPSS16.0软件包进行统计。实验结果数据采用均数±标准差表示,组间差异比较用单样本方差t检验,P<0.05表示有统计学差异。结果:1、荧光显微镜下观察含药血清组细胞数明显多于空白血清组及空白对照组,含药血清组细胞突起生长更密集,交织成网状,荧光亮度更强。2、缺氧损伤后,1%浓度的含药血清组细胞存活率为0.537±0.010,高于损伤对照组细胞存活率0.221±0.033(P<0.01),亦高于同浓度空白血清组细胞存活率0.228±0.039(P<0.01),接近NGF组细胞存活率0.549±0.006(P>0.05)。3、1%浓度的含药血清可以预防缺氧损伤后DRG神经元SOD含量的下降,减少MDA及LDH的生成。而同浓度的空白血清对DRG神经元无明显的预保护及抗缺氧损伤作用。结论:1.滋补脾阴方药含药血清对神经元的生长有促进作用;2.滋补脾阴方药含药血清具有提高神经元抗缺氧损伤能力的作用;3.1%浓度时滋补脾阴方药含药血清能发挥最佳促进生长及抗缺氧的保护作用。且无明显毒性作用。