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目的：卵巢癌在妇科的恶性肿瘤中病死率极高,是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,严重威胁着女性健康。虽然诊断方法仍在不断的改进,但是卵巢癌的易复发及伴随出现的转移和多重耐药性,严重影响到卵巢癌的冶疗效果。由于在患病早期无特异性症状,缺乏有效的早期诊断措施,大部分患者确诊时已多处于晚期,让患者错过了最佳的治疗时机。为了能够做到早诊断早治疗,在早期有一些肿瘤抗原标记物,例如经典的CA125、CA199等,对于不同类型、不同部位的肿瘤大多伴有不同程度的变化。特别是一些肿瘤标记物随着恶性程度的增加有相应规律的变化,虽不具有普遍性,但已经对卵巢癌的早期诊断、治疗及手术预后疗效的改善给予了极大的参考意见。脂质运载蛋白-2(lipocalin-2, LCN-2),是分泌型糖蛋白,又命名为中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associated lipocalin, NGAL),属于脂质运载蛋白家族的第2号成员。研究发现,LCN-2的上凋与多种人类肿瘤相关,包括肝癌,乳腺癌,子宫内膜癌和卵巢癌。然而,LCN-2在肿瘤细胞中的生物学作用还不是很清楚。本研究通过过表达LC-2的方法来检测其对卵巢癌细胞增殖的影响,探讨LCN-2在卵巢癌中的表达和发展规律,为进一步研究LCN-2在卵巢癌细胞中的作用机制提供信息平台,以及为治疗卵巢癌提供更多有价值的信息。方法：Western Blot分析检测四种细胞系中(CAOV3, ES2, OVCAR3, SKOV3)LCN-2蛋白水平上的表达；瞬时转染LCN-2质粒后通过WesternBlot分析检测过表达LCN-2在卵巢癌细胞ES2中的蛋白表达；进行G418筛选,探测未转染质粒的ES2细胞的生存临界浓度；采用稳定转染法观察过表达LCN-2在卵巢癌细胞中的生长状况,通过G418的筛选建立稳定过表达LCN-2的ES2细胞系；MTT细胞增殖试验检测过表达LCN-2对卵巢癌细胞增殖的影响。结果：KOV3) LCN-2表达情况,CAOV3(?)OVCAR3王高表达,ES2未表达,SKOV3较低表达Western B lot检测这四种卵巢癌细胞系LCN-2表达情况,CAOV3和OVCAR3明显表达,ES2未表达,SKOV3无明显表达。常规细胞培养后,镜下观察四种细胞系的生长状态,CAOV3和OVCAR3细胞形态大多为菱形和多边形上皮样细胞状,ES2细胞形态呈椭圆形,SKOV3呈梭状上皮样细胞形态。2构建pcDNA3.1/mycHis-LCN-2质粒DNA后,采用瞬时转染法,验证质粒及LCN-2抗体的可用性首先我们用实验室已有的空载体pcDNA3.1/mycHis-LACZ 和PEGFP-N3,分别构建了pcDNA3.1/mycHis-LCN-2和PEGFPN3-LCN-2重组质粒DNA。因LCN-2在ES2细胞中不表达,所以选择ES2做瞬时转染,pcDNA3.1/mycHis-LCN-2, PEGFPN3-LCN-2作为实验组；pcDNA3.1/mycHi-s-LACZ, PEGFPN3作为对照组,24小时后全部收获,Western Blot分析检测转染LCN-2的实验组均明显过表达,充分可以说明LCN-2质粒构建成功,抗体结合良好。3 G418药物浓度检测ES2产生耐药的生长临界浓度是700μg/m1。G418药物浓度梯度(200μg/ml,400μg/ml,600μg/ml,900μg/ml, 1200μg/ml,1500μg/ml)置于六孔板中,观察7天后发现ES2产生耐药的生长临界浓度为700μg/ml。4成功构建LCN-2稳定过表达的ES2细胞系瞬时转染的预实验成功后,稳定转染ES2细胞系,用700μg/ml G418进行筛选,约两周后克隆形成。选择生长状态良好的细胞团进行增殖,收获后Western Blot分析检测发现LCN-2在#2,#3,#12,#14,#21,#22,#23和#31细胞株中的表达相对于V1,V2,V3和V7中明显升高。Western Blot再次分析验证了LCN-2在#2,#3,#31和#23中的稳定过表达,并镜下观察发现ES2细胞株和稳定转染LCN2后的ES2形态无明显变化。5 MTT细胞增殖试验发现LCN-2有促进卵巢癌细胞增殖的作用我们选取稳定过表达LCN-2的#2和#3的两个细胞株作为实验组；空载体V1和V2的细胞株作为对照组,经过6天的连续检测,LCN-2过表达组,相对于对照组,细胞的增殖速度明显加快,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：1成功构建了pcDNA/mycHis-LCN-2和PEGFPN3-LCN-2表达载体。2 LCN-2在卵巢癌细胞系中的表达差异,对于研究LCN-2在卵巢癌中的作用具有重要的价值。3 LCN-2的抗体与抗原结合良好,抗体效价较高。4构建的LCN-2稳定过表达的细胞系为以后进一步研究LCN-2在卵巢癌中的生物学作用打下基础。5过表达LCN-2对卵巢癌细胞的增殖有促进作用。