菠菜(Spinacia oleracea)是苋科菠菜属植物中的一种典型的绿叶蔬菜,叶片肥厚叶肉多,除含有丰富的营养物质外,还含丰富的黄酮类化合物,是黄酮类化合物的良好原料。目前有关于菠菜黄酮类化合物(后面统称菠菜黄酮)提取方面的研究,而将提取得到的黄酮进一步分离纯化,并对纯化物进行成分分析和抗氧化活性研究还未有报道,为了开发利用该资源,本论文采用超声提取、纤维素酶提取、纤维素酶联合超声提取三种方法来提取菠菜黄酮,优化提取方法,并对提取物进行分离纯化、成分分析及抗氧化活性研究,研究结果如下:1、菠菜黄酮的提取。通过对乙醇、甲醇、丙酮三种有机溶剂进行筛选,确定甲醇提取率最高为10.55±0.13%,故选择甲醇为整个实验的提取剂;超声提取法通过单因素和响应面实验确定最佳提取条件为:提取温度40℃、提取时间45 min、料液比1:35g/mL,该条件下提取率为13.05±0.14%;纤维素酶提取通过单因素和正交试验确定最佳提取条件为:酶添加量1.5 U/g,提取温度40℃,料液比1:50 g/mL,酶解pH5.0,该条件下提取率为14.10±0.13%;纤维素酶联合超声提取最佳提取条件为:提取温度60℃,提取时间45 min,甲醇浓度70%,酶解pH5.0,酶添加量1.2 U/g,料液比1:30 g/mL,该条件下提取率为15.56±0.13%。三种方法比较确定最优提取方法为纤维素酶联合超声提取法。2、菠菜黄酮的纯化。通过吸附和解析实验比较AB-8、D101、ADS-17三种大孔树脂对菠菜黄酮的吸附和解析性能,优选AB-8大孔树脂为纯化实验所用树脂。分别以吸附量和解析率为参考指标,对纯化条件进行优化,其最优纯化条件为:提取液浓度3mg/mL、提取液pH3.0、解析液浓度70%、解析液pH5.0。3、菠菜黄酮的成分分析。将纯经化得到的菠菜黄酮以及含有没食子酸、绿原酸、儿茶素、芦丁、芹菜素、山奈酚、槲皮素七种黄酮类化合物单体的混合标准品溶液在色谱柱上进行分离,根据混合标准品的保留时间可以看出菠菜黄酮中含有混合标准品中的七种黄酮类化合物单体成分,测的含量分别为:0.83、1.37、0.64、1.46、2.12、1.25、1.87 mg/g。将混合标准品在特定条件下以不同浓度进样,得出峰面积与进样浓度之间存在良好的线性关系。方法学验证结果表明:仪器的精密度、供试样品的稳定性、实验的重复性,以及实验方法的准确性均表现出良好的状态。4、菠菜黄酮的抗氧化活性研究。菠菜黄酮对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除能力与样品浓度均呈现较好的剂量关系。其中羟基自由基清除能力次序为:VC>精制菠菜黄酮>粗制菠菜黄酮;DPPH自由基清除能力次序为:精制菠菜黄酮>VC>粗制菠菜黄酮;在超氧阴离子自由基清除率的测定中清除效果均较差。