论文部分内容阅读
目的:研究显示芍药苷(Paeoniflorin,PAE)具有较好的肝保护作用;本研究体外拟用TGF-β刺激的HSCs细胞、体内以腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)的Balb/c小鼠为研究对象,建立肝纤维化模型,探究芍药苷通过LXRs-STAT3信号通路,对肝纤维化的调控改善作用及其潜在的分子机制。方法:体外实验选用HSCs细胞,TGF-β刺激后,给予0-200μM的芍药苷处理24h,通过MTT法检测芍药苷对HSCs细胞存活率的影响。利用浓度(0、6.25、12.5、25、50、100μM)的芍药苷孵育HSCs,24h后,提取细胞总蛋白进行蛋白印迹分析实验,检测HSCs细胞中LXRα、LXRβ、STAT3等蛋白的表达水平;并提取RNA,通过PCR定量分析,检测mRNA的表达水平,以及免疫荧光染色做进一步验证。体内将小鼠随机分四组,即正常组、TAA模型组、芍药苷低剂量(10mg/kg)、高剂量(20mg/kg)给药组,每组5只。正常组采用标准饮食;TAA模型组及芍药苷给药组腹腔注射TAA(100或200mg/kg),以建立小鼠肝纤维化模型;给药组每天灌胃芍药苷1Omg/kg或20mg/kg,实验周期为4周,在末次给药6h后,收集小鼠血清和肝脏组织,利用试剂盒检测血清中ALT和AST的水平,并取肝脏组织石蜡切片进行H&E染色、Masson染色、天狼猩红染色和IHC免疫组织化学染色,来观察肝组织病理学变化;并通过蛋白印迹法、PCR定量分析法、免疫荧光检测肝脏中LXRα、LXRβ、STAT3等蛋白及mRNA的表达。结果:体外实验中,MTT结果显示:0-1OOμM的芍药苷对HSCs的生长率无显著影响;芍药苷能够显著降低活化的HSCs中肝纤维化标记物α-SMA、Collagen-I的蛋白及mRNA表达;芍药苷可激活LXRα、LXRβ的表达,从而抑制P2X7r、NLRP3、caspase-1等多种炎症因子的释放,并进一步激活STAT3信号因子,增加其磷酸化修饰表达来抑制肝纤维化。体内实验结果显示:芍药苷能够抑制TAA诱导的肝损伤小鼠血清中ALT、AST的活性表达;通过H&E、Masson色、天狼猩红染色等可判断,芍药苷可减轻小鼠的肝组织病变;芍药苷抑制了小鼠肝纤维化标志物α-SMA、Collagen-I的蛋白及mRNA表达;激活并上调了 LXRα、LXRβ的蛋白及基因表达,并阻止了P2X7r、NLRP3、caspase-1等一系列的炎症因子级联反应,进而激活了 STAT3并上调其磷酸化P-STAT3的表达。结论:芍药苷能降低肝纤维化基本指标α-SMA、Collagen-I的表达,有效的抑制促炎因子的释放,可能通过调控LXRs-STAT3信号通路改善肝纤维化的发展进程。