抗体是肿瘤导向治疗的重要工具，用抗体将药物导向病灶能够显著降低药物的副作用。目前抗体已经达到临床应用阶段，不过在抗体药物治疗应用中始终存在着很多局限。首先完整抗体本身是大分子药物，分子量较大，难以穿透到达实体瘤内部。另外，单克隆抗体的鼠源性会诱发人抗鼠抗体反应，而小型化抗体能够同时解决上述两个问题，因此在抗体药物研究领域药物分子小型化成为新的研究趋势。在抗体的小型化中研究人员主要着眼于F(ab’)2、Fab、scFv以及单域抗体(dAbs)等。单域抗体的分子大小只有全抗的1／12，同时它的免疫原性很低。除此之外，单域抗体和其它抗体小型化分子一样具有较高的肿瘤穿透率，用单域抗体作为小分子导向药物的“载体”携带高效药物能够构建强效的抗体药物。本研究中，我们构建并制备大鼠抗肝癌单克隆抗体3A5衍生的单域抗体以及单域抗体和力达霉素的强化融合蛋白，并对其生物活性进行了研究。 1．大鼠mAb 3A5的免疫亲和性检测 大鼠抗肝癌单克隆抗体3A5是用人肝癌Bel 7402细胞免疫LOU／C大鼠后取其脾细胞和IR983F浆细胞融合的杂交瘤细胞所产生的。我们采用免疫细胞组化的方法对mAb 3A5进行的检测。免疫荧光分析结果表明mAb 3A5主要存在于Bel 7402的细胞膜上。同时Western blot分析表明mAb 3A5特异的与Bel 7402细胞的40kDa和60kDa蛋白相结合。这些结果表明mAb 3A5可以在抗癌导向治疗中作为一个有效的抗癌药物“载体”。 2．制备、构建以及表征大鼠抗肝癌轻链单域抗体VL以及单域抗体与力达霉素强化融合蛋白VL-LDP-AE 单域抗体(single domain antibody)是抗体的最小功能结合单位，相当于人抗体的重链或轻链可变区(VH／VL)，是继全抗、F(ab’)2、Fab、scFv之后的新一代的治疗抗体。单域抗体具有传统抗体和小分子药物的双重优势，作为肿瘤靶向药物的载体有着诱人的前景。大分子肽类抗肿瘤抗生素力达霉素(lidamycin，LDM，