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目的:IgA肾病(IgAN)是最常见的原发性肾小球肾炎,肾小球系膜区IgA1沉积和系膜细胞增殖是其主要病理特征。免疫学发病机制是目前IgA肾病研究重点之一。趋化因子受体2(CCR2)是单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)受体,属G蛋白耦联的受体超家族,CCR2与MCP-1特异性结合,可以参与多种生理功能,比如细胞的生长、发育、分化、凋亡和分布等,在病理过程中也具有重要作用,如炎症反应、病原体感染、创伤修复及肿瘤形成和转移等。本研究以IgA肾病患儿肾脏组织、IgA大鼠模型以及培养的系膜细胞为对象,采用多种实验技术,从整体、细胞和分子等不同水平,检测IgA肾病肾小球细胞CCR2信号的表达,采用CCR2受体拮抗剂RS102895干预IgA肾病模型大鼠及体外培养的系膜细胞,观察CCR2信号与IgA肾病IgA沉积、系膜细胞增生以及炎症反应中的作用,为IgAN的发病机制研究提供一条新思路。方法:第一部分---CCR2在IgA肾病患儿肾组织中表达收集2014年7月~2017年9月在我科住院15例IgA肾病患儿血、尿和肾活检样本,对照组8例肾组织标本取自肾脏疾病术后病理检查正常的患儿。正常对12例血、尿标本取自我院儿保门诊健康查体的儿童。采用HE染色、Masson染色、PAS染色和PASM染色对肾脏标本进行病理染色,免疫组化和免疫荧光检测IgA1沉积,以及CCR2、MCP-1、IL-6、TNF alpha、IL-17、IL-1、CD89和CD71的表达。第二部分---CCR2表达在IgA肾病大鼠肾脏组织中表达6周龄Wistar雄性大鼠,采用联合应用LPS+BSA+CCl4作为造模方法,建立IgA肾病大鼠模型。IgA肾病模型组随机分成三组,IgA肾病组(IgAN-Model)、CCR2阻滞剂组(RS102895)、奥美沙坦组(Olmesartan)。CCR2阻滞剂RS102895和奥美沙坦干预大鼠模型。采用HE染色和Masson染色等病理染色,以及免疫荧光、免疫组化、蛋白印迹和定量PCR,检测模型大鼠肾组织系膜增生、IgA沉积等病理变化,以及CCR2、MCP-1、TNF alpha、IL-6、IL-17和CD71的表达;CCR2阻滞剂RS102895和奥美沙坦干预IgA肾病模型大鼠后,大鼠肾脏组织的病理改变,以及CCR2、MCP-1、TNF alpha、IL-6、IL-17和CD71的表达变化。第三部分---CCR2信号对肾小球系膜细胞增殖的影响收集15例IgA肾病患儿和健康体检儿童的外周血,纯化IgA1。体外培养及鉴定人系膜细胞,IgA肾病患儿来源的IgA1干预体外培养人系膜细胞,采用BrdU掺入实验和CCK-8检测系膜细胞增殖,蛋白印迹检测系膜细胞CCR2表达;CCR2拮抗剂RS102895干预培养的系膜细胞,检测炎症因子MCP-1、IL-6和TNFalpha表达,以及p-JNK、p-NF-κB、p-P38MAPK和p-ERK1/2磷酸化水平。结果:第一部分---CCR2在IgA肾病患儿肾组织中表达IgA肾病患儿肾组织中CCR2表达显著升高,阳性信号集中在肾小球系膜细胞。患儿Lee病理分级与CCR2阳性信号强度正相关,但与IgA沉积强度无关。IgA肾病患儿肾组织中MCP-1、TNF alpha、IL-6和IL-17表达显著升高。结果提示CCR2信号途径可能参与IgA肾病病程的发生和发展。第二部分---CCR2表达在IgA肾病大鼠肾脏组织中表达模型大鼠出现肾小球IgA沉积、系膜细胞增生。模型大鼠肾小球和肾小管均表达CCR2信号,IgA肾病模型大鼠肾脏组织CCR2阳性信号明显增强,CCR2拮抗剂能减少模型大鼠的肾小球IgA沉积、系膜细胞增生。IgA肾病模型大鼠肾组织中MCP-1、TNF alpha、IL-6和IL-17表达显著升高,CCR2拮抗剂能降低IgA肾病模型组肾组织上述阳性信号表达。CCR2拮抗剂和奥美拉坦能减少模型大鼠系膜增生和炎症反应,提示CCR2信号途径可能参与IgA肾病模型的发生和发展。第三部分---CCR2信号对肾小球系膜细胞增殖的影响IgA肾病患儿来源的IgA1能促进体外培养的系膜细胞增殖。患儿来源的IgA1明显增加CCR2表达,CCR2拮抗剂RS102895能抑制患儿来源的IgA1诱导的系膜细胞增殖。患儿来源的IgA1明显增加MCP-1、IL-6和TNFalpha表达,增加系膜细胞p-JNK、p-NF-κB、p-P38MAPK和p-ERK1/2磷酸化水平,CCR2拮抗剂RS102895能抑制患儿来源IgA1诱导的MCP-1、IL-6和TNFalpha表达,以及p-JNK、p-NF-κB、p-P38MAPK和p-ERK1/2磷酸化水平。提示CCR2参与患儿IgA1诱导的系膜细胞增殖。结论:(1)IgA肾病患儿肾小球系膜细胞CCR2表达显著升高,患儿Lee病理分级与CCR2阳性信号强度正相关。(2)拮抗CCR2能缓解IgA模型大鼠的肾脏病理改变;减少IgA肾病模型大鼠肾组织和体外培养系膜细胞的炎症因子表达;降低JNK、NF-κB、P38MAPK和ERK1/2磷酸化水平。(3)CCR2参与IgA肾病患儿系膜细胞增殖及炎症反应。