论文部分内容阅读
目的：选择对非小细胞肺癌一线化疗药物吉西他滨敏感的人非小细胞肺癌细胞系，以吉西他滨为诱导药物，初步探讨不同诱导方法对人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系建立的影响、人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系的生物学特性以及人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系敏感药物对其的作用。方法：以目前常用的两种诱导方法“高浓度间歇诱导”和“药物浓度递增诱导”为依据，模仿临床用药方式，设计了“吉西他滨临床血浆峰浓度间歇诱导”、“吉西他滨2／3临床血浆峰浓度间歇诱导”、“吉西他滨临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导”和“吉西他滨2／3临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导”4种诱导方法；根据MTT法检测结果，从不同病理类型人非小细胞肺癌细胞系中筛选出吉西他滨敏感细胞系人肺腺癌细胞系A549和人肺大细胞癌细胞系NCI-H460，以非小细胞肺癌的一线化疗药物吉西他滨为诱导药物，采用如上所述4种方法进行诱导，在诱导的不同时间段观察其形态学特征、耐药指数、耐药谱、生长曲线及倍增时间、细胞周期和DNA含量等指标，并对结果进行分析，初步判定4种诱导方法对人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系建立的影响；在此过程中，还检测了其非小细胞肺癌相关肿瘤标志物的表达情况，并分别从DNA、mRNA和蛋白水平研究其生物学特性；最后，从人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系的耐药谱中选择敏感药物初步研究其对人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系生物学特性的作用。结果：成功建立了人非小细胞肺癌吉西他滨耐药细胞系A549／Gem(包括A5491-1／Gem、A5491-2／Gem、A5492-1／Gem和H4602-2／Gem)和H460／Gem(包括H4601-2／Gem、H4602-1／Gem和H4602-2／Gem)，其耐药指数依次为38.277、7.263、115.297、25.679、1.644、129.783、8.695。倒置光学显微镜下可见：A549细胞呈梭形，大小一致；NCI-H460细胞呈多边形，大小一致；而产生耐药性的细胞形态各异，大小不一，且体积明显增大，透光性减弱。进一步研究发现，耐药细胞系均产生了不同范围、不同程度的多药耐药性，其生物学特性差