维生素D3(Vitamin D3,VD3)是一种脂溶性的维生素,属于一种作用于钙磷代谢的激素前体,又叫做“阳光维生素”。VD3具有很多方面的功效,如调节钙磷代谢,预防骨质疏松,改善心脑血管疾病,提高免疫力等作用。但是由于VD3是脂溶性的,不溶于水,限制了其药效。为了提高VD3的生物利用度,需要一种更为安全高效的VD3制剂。脂质体是一种单层或多层两性双分子层组成的结构,内部包含水溶性或脂溶性物质,可以作为药物载体,达到提高药效和降低副作用的目的。而本文主要利用VD3的高效抗氧化性,阻止皮肤细胞中自由基的过度产生,提高自由基清除酶的活性,将VD3与脂质体的结合,制备成维生素D3脂质体(L-VD3)来达到防止皮肤光老化的作用。本文主要包括如下内容:1.VD3体外分析方法学的建立。建立了VD3的体外分析方法-高效液相色谱法(HPLC),使用此方法得到的VD3的精密度和回收率均符合体外分析测定要求。HPLC测定L-VD3中的药物含量,并且该方法测定的L-VD3中药物的回收率符合体外分析要求。建立了用超滤离心法来分离游离VD3,进而测定L-VD3的包封率的方法。此方法可以很好的使游离药物分离,并且方便有效,且该法测定的VD3的精密度和回收率也均符合体外分析测定的要求。2.VD3常规脂质体制备及性能评价分别就乙醇注入法,薄膜均质法,以及反向蒸发法对L-VD3的制备方法进行了筛选,对比包封率和脂质体的粒径,得到乙醇注入法是制备L-VD3的最适合的方法。接着分别就L-VD3配方中磷脂含量、磷脂与胆固醇的比例、脂药比以及磷酸缓冲液的PH值进行单因素实验。筛选出来磷脂含量、磷脂与胆固醇的比例、脂药比作为主要的考察对象进行响应面优化实验,得到最优工艺配方为:磷脂含量为25mg,磷脂与胆固醇的比例为4.5:1,脂药比为2.5:l。以最优配方条件下得到vd3常规脂质体的包封率的理论值为87.83%,实际值为86.79%。3.l-vd3的稳定性研究本文在温度、光照、冻融的条件下进行了影响l-vd3稳定性因素的测试。其中温度在4-40℃的条件下,包封率基本不发生太大变化,稳定性较好,适宜保存l-vd3;光照对l-vd3的稳定性没有过多影响,因此可以说明vd3在制备成脂质体之后对光的稳定性大大提高了,可以不用避光保存;冻融条件对l-vd3的稳定性也没有过多影响,可以说明vd3制成脂质体后对温度的突变稳定性较好,也可以很好的适应温度的变化。另外,本文进行了vd3的体外释放试验,发现l-vd3在皮肤中的单位截留药量为182.13μg/cm2,而vd3溶液在皮肤中的单位截留药量为113.82μg/cm2,l-vd3的单位截留药量要远大于vd3溶液,并且l-vd3的透皮量也小于vd3溶液,因此将vd3做成脂质体会更有利于皮肤吸收。之后又进行了加速实验和长期实验,发现l-vd3的包封率和其外观形态并没有太大的变化,说明l-vd3的稳定性较好。4.l-vd3的药效研究本文建立了皮肤光老化模型。经过晒伤处理的大鼠皮肤都有明显的褶皱,红肿,斑点,白块等不同程度的光老化现象,说明模型建立成功。药物治疗了一段时间之后观察大鼠的皮肤状态,发现涂抹l-vd3和阳性对照药物后的大鼠皮肤基本上恢复正常,没有明显的白斑褶皱破损等现象,光洁有弹性;涂抹了vd3溶液的大鼠皮肤状况也有一定的改善,虽然仍有有一些黄斑红点,但不是很多;而涂抹pbs溶液的阴性对照组大鼠皮肤依旧有红斑出血白斑褶皱等光老化现象,没有得到改善。之后将各组大鼠的皮肤进行he染色,观察切片的电镜图片,发现涂抹l-vd3和阳性对照药物的大鼠表皮真皮结构基本完整,内部纤维组织、腺体等排布均匀,与正常的大鼠皮肤组织切片状态相差无几;涂抹了vd3溶液的大鼠表皮真皮结构略有改变,内部纤维组织、腺体个别变形,但整体上比较有序排列;而涂抹pbs溶液的阴性对照组大鼠表皮真皮严重分层,之间的界限模糊不清,内部腺体纤维也杂乱无章甚至变形,皮肤损伤状况没有改善。以上结果说明,L-VD3可以有效的防止皮肤的光老化现象,有比较显著的效果。