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内参基因,又称为管家基因,是所有细胞中稳定表达的一类基因,该基因表达水平受外界因素的影响较小,且在各个生长发育阶段的绝大多数组织中都持续表达。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是我国海南等南方沿海地区深水网箱养殖的主要品种。本研究利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术结合geNorm和NorrmFinder算法数据分析,对不同条件刺激下稳定可靠的卵形鲳鲹内参基因进行了筛选。本研究结果将为卵形鲳鲹实时荧光定量PCR相关实验在内参基因方面的选择提供依据,并为卵形鲳鲹的免疫相关研究提供参考。本研究挑选了八个常见内参基因,即Actin,GAPDH,18SrRNA,B2M,EF1A,UBCE,TTLL1和RPL13,进行稳定内参基因的筛选。结果表明,挑选的八个内参基因在不同的组织中的表达存在差异。在正常生理条件下,B2M和18S是最稳定的内参基因。通过poly I:C刺激卵形鲳鲹12h与48h后,分别检测其脾脏、头肾、肝脏、鳃、肠、脑、肌肉和心脏组织中内参基因的表达情况,不同组织中最稳定的内参基因有所不同。geNorm分析结果表明,在polyI:C刺激12h后,Actin/B2M,B2M/UBCE,Actin/UBCE,Actin/UBCE,RPL13/B2M,B2M/UBCE,B2M/TTLLI 和UBCE/GAPDH分别是卵形鲳鲹脾脏、头肾、肝脏、鳃、肠、脑、肌肉和心脏最稳定的内参基因。在 polyI:C 刺激 48h 后,B2M/RPL13,B2M/RPL13,UBCE/TTLL1,Actin/EFIA,RPL13/B2M,,RPL13/B2M,Actin/GAPDH 和 TTLL1/RPL13 分别是卵形鲳鲹脾脏、头肾、肝脏、鳃、肠、脑、肌肉和心脏最稳定的基因。NormFinder分析结果与geNorm的结果基本一致。说明在polyI:C刺激下,没有单一基因或单对基因可以作为所有组织类型的通用内参基因;若分别选取单个基因,则在polyⅠ:C刺激下,卵形鲳鲹脾脏、肾脏、肝脏、鳃、肠、脑、肌肉和心脏中最稳定的内参基因分别足B2M,B2M,UBCE,Actin,B2M/RPL13,B2M,B2M 和 RPL13。此外,本研究以哈维氏弧菌、迟缓爱德华氏菌和无乳链球调刺激后,结合geNorm与NormFinder,对不同细菌刺激后稳定内参基因进行分析,以确定最合适稳定的内参基因。geNorrn分析结果表明,在哈氏弧菌感染48h后,EF1A/Actin,18SrRNA/B2M,UBCE/B2M,18SrRNA/B2M分别为免疫相关器官脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因;迟缓爱德华氏菌刺激 48h 后 18SrRNA/EF1A,18SrRNA/B2M,B2M/RPL13,18S rRNA/EF1A分别为脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因;无乳链球菌刺激481h后18S rRNA/EF1A,B2M/18S rRNA,B2M/Actin,18S rRNA/B2M 分别为脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因。Normfinder分析结果表明,哈氏弧菌刺激48h后,EF1A,18S rRNA/B2M,UBCE/B2M,18SrRNA分别为脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因;迟缓爱德华氏菌刺激48h后,UBCE,18S rRNA/B2M,B2M/RPL13,18S rRNA分别为脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因;无乳链球菌刺激48h后,18S rRNA/EF 1 A,B2M,B2M/Actin,18SrRNA/B2M分别为脾脏、肾脏、肠和鳃最稳定的内参基因。因此,内参基因不仅在不同的组织中有差异,不同的病原刺激后内参基因的稳定性也有差异。在不同细菌刺激后进行分析,EF1A,B2M,B2M,18S rRNA可分别作为脾脏、肾脏、肠和鳃在细菌刺激下最稳定的内参基因。