研究背景：肉瘤是最常见的原发性高度恶性肿瘤之一,起源于间叶组织的恶性肿瘤称为肉瘤,多发生于皮肤、皮下、骨膜及长骨两端,肉瘤生长迅速,肿瘤晚期常有坏死、出血、切面灰红色、质均匀细如生鱼肉状,早期即可发生血行转移。骨肉瘤是其中最常见的骨恶性肿瘤,大约占儿童恶性肿瘤的2.4%,10-20岁为骨肉瘤的发病的高峰期,好发于生长活跃的干骺端,常见发病部位为股骨远端和胫骨近端。以能够产生骨样组织的梭形基质细胞为特征,骨肉瘤发展迅速,病程短,开始在皮质内生长,可逐渐向骨髓腔发展,有时向外突破骨膜,侵入周围软组织间叶组织的恶性肿瘤,并且多数于疾病早期出现肺部远处转移,目前,约有80%的骨肉瘤患者被认为存在肺转移,但是目前经检测手段检查仅能发现8-15%。多数骨肉瘤病人都有高致残率且预后不良。近年来,虽然骨肉瘤新辅助化疗方案巳取得一些突破性进展,但由于肉瘤发病因素的多样性和癌细胞的复杂性,不少患者预后不佳,所以骨肉瘤的治疗仍然是个复杂的问题。目的：一、探索出建立稳定标记的人骨肉瘤143B细胞系裸鼠原位骨肉瘤并发肺转模型,对肿瘤生长进行活体荧光成像观察,利用光学分子成像实现无创、实时和连续观察肿瘤的生长。二、初步研究人重组内皮抑素(恩度)对人骨肉瘤143B细胞裸鼠原位肿瘤模型的作用,结合上述骨肉瘤模型瘤模型,观察内皮抑素及联合顺铂,对人骨肉瘤细胞移植瘤裸鼠的作用。方法：一、利用含红色荧光蛋白的病毒载体DsRed转染人骨肉瘤细胞143B细胞系,行细胞培养并能使长期稳定表达的方法,将标记的人骨肉瘤143B细胞,接种植裸鼠胫骨近端建立原位肿瘤模型,并在不同时间对裸鼠活体成像,观察肿瘤的生长变化及肺转移情况。二在利用建立的肿瘤模型研究内皮抑素对人骨肉瘤的抑制作用,并验证其对骨肉瘤生存期的作用。第一部分：用前述建模方法方法在15只裸鼠上建立标记的裸鼠移植瘤模型,待80%裸鼠通过荧光观察成瘤长出后后分组,随机分成三组,每组5只,为阴性对照组生理盐水5只,实验组单独内皮抑素低剂量(0.75mg/kg)治疗组,实验组单独内皮抑素低剂量(1.5mg/kg)治疗组组5只,给药方式均为腹腔内注射,每周2次光学活体成像仪下进行活体成像,观察荧光团块变化同时传统方法测量肿瘤体积,给药三周后比较各组抑瘤率。第二部分在20只裸鼠上建立标记的裸鼠移植瘤模型,待80%裸鼠长出后后分组,随机分成四组,每组5只,为阴性对照组生理盐水5只,实验组单独内皮抑素(0.75mg/kg)治疗组,实验组顺铂(5mg/kg)治疗组组5只,实验组顺铂联合内皮抑素低剂量治疗组组5只,给药方式均为腹腔内注射,每周2次光学活体成像仪下进行活体成像,荷瘤鼠给药3周后停止给药,观察动物直至荷瘤鼠自然死亡,统计不同干预措施下的生存时间。结果：成功获得了连续表达红色荧光蛋白的143B细胞系,将该细胞系接种至裸鼠胫骨近端,成瘤率100%,通过荧光成像仪可以连续对肿瘤的生长变化进行观察,并对药物治疗对瘤体的作用进行观察。应用恩度(1.5mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组,在治疗三周后,荷瘤鼠原发肿瘤的平均瘤重和生理盐水组相比较无明显的减轻,且统计学分析上无显著性差异(P>0.05)；应用恩度(0.75mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组,在治疗三周后,荷瘤鼠原发肿瘤的平均瘤重和生理盐水组相比较有明显的减轻,且统计学分析上有显著性差异(P<0.05)；应用恩度(0.75mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组、应用恩度(1.5mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组,在治疗三周后,荷瘤鼠原发肿瘤的平均肿瘤大小和生理盐水组相比较无明显的减轻,且统计学分析上无显著性差异(P>0.05)；应用恩度(0.75mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组、应用恩度(1.5mg/kg,qd×3w,腹腔注射)的治疗组,在治疗三周后各组之间的肿瘤转移率没有明显的差异(P>0.05)；从荷瘤鼠的生存时间来看,恩度治疗组的平均生存时间比对照组延长30天左右,可以提示恩度可以改善荷瘤鼠的身体状况,延长生存时间；通过监测整个实验过程中荷瘤鼠的体重和身体状况,可以提示生理盐水组、各剂量的恩度治疗组的药物没有明显的副作用和毒性；而应用顺铂的治疗组5在给药一周内全部死亡,说明5mg/kg剂量的顺铂对动物有明显的毒性作用。结论：通过该模型可以观察原位骨肉瘤的不同生长过程并且出现肺转移,并且可以通过活体成像仪对其进行连续观察,因此可以成为研究骨肉瘤的生长及肺转移因素的促进或限制因素的一种重要工具。该模型的建立方法可靠,简单,可重复。单用及联合使用顺铂对143B骨肉瘤毒性作用较大,本次实验中顺铂作用无统计学意义,单用恩度各剂量治疗对肿瘤的抑制及对荷瘤鼠肺转移的抑制作用不明确,但对荷瘤裸鼠的生存时间具有明显延长作用,其相关作用及机理有待进一步研究。