【摘 要】
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共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是必需脂肪酸亚油酸的衍生物,具有抗肿瘤、降低胆固醇、抗氧化、增强免疫等功能,而亚油酸本身并不具备这些功能。已有实验证明,亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)可将亚油酸转化为共轭亚油酸。亚油酸异构酶及其基因的获得对于工业化生产CLA具有重要的意义。本实验以发酵菌剂为原料,从中分离出一株菌落形态上与
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共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是必需脂肪酸亚油酸的衍生物,具有抗肿瘤、降低胆固醇、抗氧化、增强免疫等功能,而亚油酸本身并不具备这些功能。已有实验证明,亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)可将亚油酸转化为共轭亚油酸。亚油酸异构酶及其基因的获得对于工业化生产CLA具有重要的意义。本实验以发酵菌剂为原料,从中分离出一株菌落形态上与嗜酸乳杆菌相似的菌株,经16Sr DNA鉴定后确定为嗜酸乳杆菌NCFM,根据Genbank中公布的亚油酸异构酶基因序列设计特异性引物进行PCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR、酶切分析和DNA测序鉴定克隆成功后,亚克隆到表达质粒pMG36e中,构建表达载体pMG36e-LAI,转化到大肠杆菌DH5α中,经菌落PCR和酶切分析初步证明转化成功后进行表达分析。将pMG36e-LAI-DH5α菌株进行细胞破碎,提取粗酶液经过硫酸铵分级沉淀、层析分离纯化亚油酸异构酶后,通过酶活力测定和SDS-PAGE检测亚油酸异构酶的分子量,证明LAI获得了表达,这将为LAI基因转入乳酸菌和其它基因工程菌奠定基础,不仅会进一步生产CLA提供技术支撑,也会有助于工业化生产高产量、高活性亚油酸异构酶制剂。
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